本文選題：惡性瘧原蟲 + Pfs蛋白��； 參考：《中國(guó)新藥雜志》2013年22期

【摘要】：目的:探索Pfs25蛋白在畢赤酵母中高效分泌表達(dá)策略,提高Pfs25蛋白的表達(dá)量。方法:本研究主要通過(guò)4個(gè)方面深入研究Pfs25蛋白的高效表達(dá)策略。①構(gòu)建Pfs25蛋白的誘導(dǎo)型表達(dá)重組株pPICZαA-Pfs25/GS115和組成型表達(dá)重組株pGAPZαA-Pfs25/GS115,并比較兩酵母菌株的表達(dá)量差異。②從培養(yǎng)基、pH值、表達(dá)時(shí)間等方面入手,分別對(duì)誘導(dǎo)型和組成型分泌表達(dá)條件進(jìn)行研究,尋找適合Pfs25蛋白表達(dá)的最佳條件。③利用pAO815表達(dá)載體構(gòu)建Pfs25多拷貝重組酵母菌株pAO815-(α-Pfs25)n/GS115,通過(guò)提高pfs25基因拷貝數(shù)來(lái)提高表達(dá)量。④將畢赤酵母中蛋白二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)基因引入Pfs25重組酵母中,以提高Pfs25蛋白的分泌表達(dá)。結(jié)果:本研究成功構(gòu)建了Pfs25誘導(dǎo)型和組成型表達(dá)重組酵母菌株,實(shí)現(xiàn)了Pfs25的誘導(dǎo)型和組成型表達(dá),組成型表達(dá)量略高于誘導(dǎo)型。并通過(guò)對(duì)各種表達(dá)條件的比較研究,找到了適合Pfs25蛋白在畢赤酵母中高效分泌表達(dá)的條件。結(jié)論:通過(guò)對(duì)Pfs25蛋白高效表達(dá)策略的研究,顯著提高了Pfs25蛋白在畢赤酵母中的分泌表達(dá)水平,使其表達(dá)量提高了約5倍。
[Abstract]:Aim: to explore the strategy of Pfs25 protein secretion and expression in Pichia pastoris, and to improve the expression of Pfs25 protein in Pichia pastoris. Methods: in this study, the high expression strategy of Pfs25 protein was studied in four aspects. 1. Construction of pPICZ 偽 A-Pfs25/GS115 and pGAPZ 偽 A-Pfs25 / GS115, and comparison of the expression levels between the two yeast strains. (2) from the pH value of culture medium, In terms of expression time and other aspects, the expression conditions of inducible and constitutive secretory expression were studied respectively. To find the best conditions for Pfs25 protein expression using pAO815 expression vector to construct Pfs25 multi-copy recombinant yeast strain pAO815-( 偽 -Pfs25N / GS115. by increasing the copy number of pfs25 gene to increase the expression quantity of pAO815-Pfs25n- GS115. Because of the introduction of Pfs25 recombinant yeast, To increase the secretory expression of Pfs25 protein. Results: the recombinant yeast strains of Pfs25 inducible and constitutive expression were successfully constructed, and the inducible and constitutive expression of Pfs25 was realized, and the amount of constitutive expression was slightly higher than that of inducible type. Through the comparative study of various expression conditions, we found suitable conditions for the efficient secretion and expression of Pfs25 protein in Pichia pastoris. Conclusion: through the study of high expression strategy of Pfs25 protein, the secretory expression level of Pfs25 protein in Pichia pastoris was significantly increased, and the expression of Pfs25 protein in Pichia pastoris was increased by about 5 times.
【作者單位】： 國(guó)藥蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【分類號(hào)】：R392

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1833328