本文選題：shRNA干擾 + SUMO-�。� 參考：《中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志》2013年28期

【摘要】：目的構(gòu)建干擾人SUMO-2表達(dá)的shRNA重組質(zhì)粒載體,并篩選下調(diào)人SUMO-2表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株。方法設(shè)計并合成針對人SUMO-2的shRNA寡核苷酸,并將其克隆至pLKO.1質(zhì)粒載體上,轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞后經(jīng)嘌呤霉素篩選獲穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,并通過免疫印跡鑒定SUMO-2的表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建干擾人SUMO-2表達(dá)的pLKO.1質(zhì)粒載體,可在HCT116細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá),且能有效抑制SUMO-2蛋白質(zhì)的表達(dá)。功能研究初步證明干擾SUMO-2表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖并使處于細(xì)胞周期G1期的細(xì)胞比例上升。結(jié)論獲得了干擾人SUMO-2表達(dá)的pLKO.1-shRNA質(zhì)粒載體,以及下調(diào)SUMO-2表達(dá)的HCT116穩(wěn)定細(xì)胞株。
[Abstract]:Objective to construct a recombinant shRNA plasmid that interferes with the expression of human SUMO-2 and to screen a stable cell line that can down-regulate the expression of human SUMO-2. Methods shRNA oligodeoxynucleotides targeting human SUMO-2 were designed and synthesized and cloned into pLKO.1 plasmid vector. After transfection into HCT116 cells, a stable expression cell line was obtained by purine mycin screening, and the expression of SUMO-2 was identified by Western blot. Results the pLKO.1 plasmid vector which interfered with the expression of human SUMO-2 was successfully constructed, which could be stably expressed in HCT116 cells and could effectively inhibit the expression of SUMO-2 protein. Functional studies showed that interfering with SUMO-2 expression could inhibit cell proliferation and increase the proportion of cells in G1 phase of cell cycle. Conclusion the pLKO.1-shRNA plasmid vector which interferes with the expression of human SUMO-2 and the stable cell line of HCT116 which can down-regulate the expression of SUMO-2 were obtained.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)附屬大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所(創(chuàng)傷燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室第一研究室);
【基金】：創(chuàng)傷燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室基金(No:SKLZZ200907) 國家自然科學(xué)基金(No:30970651)
【分類號】：R341

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1823016