本文選題：寨卡病毒 + 反向遺傳學(xué)系統(tǒng)��； 參考：《暨南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)屬于黃病毒科(flaviviridae)黃病毒屬(flavivirus),其家族包括登革病毒(DENV),西尼羅病毒(WNV),日本腦炎病毒(JEV)和黃熱病病毒(YFV)等黃病毒。自2013年以來,寨卡病毒持續(xù)在全球范圍內(nèi)肆虐與爆發(fā),給人類健康帶來巨大傷害,盡管科學(xué)和公共衛(wèi)生界在過去幾年中作出及時的合作和努力,但是寨卡病毒的出現(xiàn)和致病性機(jī)制在很大程度上仍然是未知的,且市面上并沒有相應(yīng)的疫苗和抗病毒藥物。寨卡病毒感染性克隆的發(fā)展,對于解決寨卡病毒危機(jī)起到至關(guān)重要的作用。ZIKV反向遺傳學(xué)系統(tǒng)可為研究ZIKV編碼蛋白功能以及分子致病機(jī)理等方面提供可靠工具。方法:反向遺傳學(xué)系統(tǒng)是研究病毒復(fù)制和致病性的最有力工具之一,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于疫苗設(shè)計(jì)和抗病毒篩選。在本課題中,成功構(gòu)建了寨卡病毒廣州01株全長感染性克隆,建立了寨卡病毒反向遺傳學(xué)系統(tǒng)。于2016年分離了ZIKV GZ01,并使用自我剪接group Ⅱ內(nèi)含子策略成功得到了全長感染性克隆。結(jié)果:使用構(gòu)建的寨卡病毒廣州01株全長感染性克隆轉(zhuǎn)錄的RNA在體外進(jìn)行自我剪接,將剪接的RNA轉(zhuǎn)染到BHK-21細(xì)胞中,并成功拯救了具有感染性病毒。親本毒株和拯救的ZIKV具有相似的生長特征,蝕斑形態(tài)和神經(jīng)毒力。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明拯救的ZIKV保留了親本毒株的生物學(xué)性質(zhì)。此外,使用這種新建立的反向遺傳學(xué)系統(tǒng),已經(jīng)揭示了一組RNA元件的關(guān)鍵作用,即環(huán)化序列(CS)對于寨卡病毒RNA復(fù)制的影響,突出了這種新的自剪接內(nèi)含子策略在黃病毒感染性克隆的產(chǎn)生中的可靠性和潛力。
[Abstract]:Objective: Zika virus ZIKV belongs to flaviridae (flavivivirusus). Its families include Dengur virus (DENVV), West Nile virus (WNVV), Japanese Encephalitis virus (JEV) and Yellow Fever virus (YFV). Since 2013, the Zika virus has continued to wreak havoc and outbreaks around the world, causing great harm to human health, despite the timely cooperation and efforts of the scientific and public health community over the past few years. But the emergence and pathogenicity of Zika remain largely unknown and there are no vaccines or antiviral drugs available. The development of Zika virus infectious clone plays an important role in solving Zika virus crisis. ZIKV reverse genetic system can provide reliable tools for studying the function of ZIKV coding protein and molecular pathogenesis. Methods: reverse genetics system is one of the most powerful tools to study viral replication and pathogenicity, and has been widely used in vaccine design and antiviral screening. In this study, the full-length infectious clone of Zika virus strain Guangzhou 01 was successfully constructed, and the reverse genetic system of Zika virus was established. ZIKV GZ01 was isolated in 2016, and the full-length infectious clone was successfully obtained using self-splicing group II intron strategy. Results: the full-length infectious clone RNA of Zika virus strain Guangzhou 01 was spliced in vitro, the spliced RNA was transfected into BHK-21 cells, and the infectious virus was successfully saved. Parental strain and ZIKV had similar growth characteristics, plaque morphology and neurovirulence. Conclusion: the experimental results show that the saved ZIKV retains the biological properties of the parent strain. In addition, the use of the newly established reverse genetics system has revealed the key role of a set of RNA elements, namely, the effects of cyclic sequences on the replication of Zika virus RNA. It highlights the reliability and potential of this new self-splicing intron strategy in the production of yellow virus infectious clones.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R373

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本文編號：1809739