本文選題：腦梗死 + 氣虛血瘀證�。� 參考：《中國中醫(yī)科學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景中風(fēng)又稱腦卒中,它是嚴(yán)重威脅人類生命健康的重大疾病之一。調(diào)查研究顯示,在我國每年腦卒中發(fā)病新增人數(shù)約250萬,且呈逐年遞增趨勢。每年腦卒中致死人數(shù)占總死亡人數(shù)的22.45%,嚴(yán)重威脅人類健康,影響人們生活水平,并且給社會和家庭造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在腦卒中病理分型中,腦梗死約占總發(fā)病人數(shù)的四分之三;在中風(fēng)中醫(yī)辨證證型中,氣虛血瘀證最為常見。所以在進(jìn)行腦血管疾病研究時(shí)應(yīng)加強(qiáng)注重對腦梗死氣虛血瘀證的研究。疾病動(dòng)物模型的建立是疾病研究和中藥新藥研發(fā)的一個(gè)重要手段。目前,研究中常采用多因素疊加的方法來建立腦梗死氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型,雖然取得了一些進(jìn)展,但因建模方法和評價(jià)體系缺少規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化,且干擾因素復(fù)雜導(dǎo)致致病機(jī)理不容易闡明,與自然發(fā)病狀態(tài)還有一定的差距,所以往往難以得到公認(rèn)。因此本課題以多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證大鼠模型為研究對象,在之前研究者研究成果的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)并比較,嘗試得出一種穩(wěn)定的造模方法,并對模型評價(jià)體系進(jìn)行補(bǔ)充和完善,同時(shí)結(jié)合本所承擔(dān)的“973”課題的研究目標(biāo)和內(nèi)容,對此模型形成過程中機(jī)體內(nèi)與氣血相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)的變化進(jìn)行研究,為中藥新藥的研發(fā)和中藥復(fù)方功效的闡述提供有價(jià)值的研究模型和手段。第一部分 多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證大鼠模型建立方法研究1.研究目的依據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論,采用不同造模因素探討多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型的建立方法。2.材料和方法將SD雄性大鼠隨機(jī)分為5組:A.正常組:正常飲食、飲水5周,n=11;B.假手術(shù)組:僅切口、穿線,不注射熒光微球,其他同正常組,n=11;C.單純睡眠剝奪組(睡奪組):每天睡眠剝奪16h(每天16點(diǎn)至次日8點(diǎn)),共剝奪5周,n=11;D.單純多發(fā)性腦梗死組(腦梗組):于正常飼養(yǎng)1周后行多發(fā)性腦梗死手術(shù),術(shù)后繼續(xù)正常飼養(yǎng)4周,n=12;E.睡眠剝奪復(fù)合多發(fā)性腦梗死組(睡奪+腦梗組):每天睡眠剝奪16h(每天16點(diǎn)至次日8點(diǎn)),睡眠剝奪1周后行多發(fā)性腦梗死手術(shù),術(shù)后繼續(xù)睡眠剝奪4周,n=12。術(shù)后4周(睡眠剝奪5周)觀察大鼠一般表征狀態(tài),分別采集大鼠體重,抓力,負(fù)重力竭游泳時(shí)間,自發(fā)活動(dòng)路程,脈搏幅度等氣虛指標(biāo);分別采集和測定大鼠舌面圖像R、G、B值,血液流變學(xué),凝血四項(xiàng)等血瘀指標(biāo);分別采集大鼠神經(jīng)功能缺損情況評分(分別于術(shù)后24h和術(shù)后4周后各采集一次),大鼠腦表面熒光微球分布情況圖片,腦切片梗死區(qū)域分布情況圖片(于術(shù)后24h采集),腦組織病理及超微結(jié)構(gòu)觀察等多發(fā)性腦梗死疾病指標(biāo);測定腦組織勻漿液中MDA含量以及SOD、Na+-k+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性等指標(biāo)。3.研究結(jié)果(1)一般狀態(tài)觀察:正常組和假手術(shù)組大鼠一般狀態(tài)良好,三個(gè)模型組大鼠均出現(xiàn)一定程度的懶動(dòng),精神萎靡的現(xiàn)象,其中睡奪+腦梗組較其它兩個(gè)模型組情況更嚴(yán)重。(2)氣虛指標(biāo):與假手術(shù)組比較,三個(gè)模型組體重、負(fù)重力竭游泳時(shí)間、自發(fā)活動(dòng)路程、抓力和脈搏幅度均有不同程度減少(P0.05或P0.01)或有下降趨勢(腦梗組體重);與睡奪組和腦梗組比較,睡奪+腦梗組體重、負(fù)重力竭游泳時(shí)間、自發(fā)活動(dòng)路程、抓力和脈搏幅度均顯著減少(P0· 05或P0.01)。(3)血瘀指標(biāo):①舌面圖像R、G、B值:與假手術(shù)組比較,三個(gè)模型組舌面圖像R、G、B值均顯著減少(P0.01);與睡奪組和腦梗組比較,睡奪+腦梗組大鼠舌面圖像R、G、B值均顯著減少(P0.05或P0.01)。②血液流變學(xué):與假手術(shù)組比較,三個(gè)模型組在切變率5 s-1下的全血黏度均明顯增加(P0.05),睡奪+腦梗組在切變率60s-1下的全血黏度明顯增加(P0.05);三個(gè)模型組之間在各切變率下的全血黏度無明顯差異。③凝血四項(xiàng):與假手術(shù)組比較,睡奪組TT明顯減少(P0.05),腦梗組和睡奪+腦梗組PT、APTT、TT均明顯減少(P0.05或P0.01);與睡奪組和腦梗組比較,睡奪+腦梗組PT明顯減少(P0.05)。(4)腦梗死疾病指標(biāo):①神經(jīng)功能缺損情況評分:術(shù)后24h和術(shù)后4周,腦梗組和睡奪+腦梗組大鼠均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損情況,術(shù)后24h,兩組神經(jīng)功能缺損情況評分無顯著差異;術(shù)后4周,睡奪+腦梗組神經(jīng)功能缺損情況評分顯著高于腦梗組(P0.01)。②腦表觀與腦切片TTC染色觀察:術(shù)后4周腦梗組和睡奪+腦梗組大腦均出現(xiàn)熒光微球散狀分布,且局部出現(xiàn)壞死區(qū)域;術(shù)后24h大腦切片右半腦均有面積不等的白色梗死區(qū)域。③腦組織病理及超微結(jié)構(gòu)觀察:通過腦組織HE染色和電鏡觀察可見,正常組和假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)正常,睡奪組腦組織結(jié)構(gòu)基本正常,腦梗組和睡奪+腦梗組腦組織結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯病理性改變。(5)生化指標(biāo):與假手術(shù)組比較,三個(gè)模型組腦皮層MDA含量均顯著增加(P0.05 或P0.01),SOD、Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-ATP酶活性均顯著降低(P0.05或P0.01);與睡奪組和腦梗組比較,睡奪+腦梗組大鼠腦皮層MDA含量明顯增加(P0.05),SOD、Na-+KC-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均顯著降低(P0.05 或P0.01)。4.結(jié)論單純證候造模,即長時(shí)間睡眠剝奪可以使大鼠出現(xiàn)氣虛血瘀證候表現(xiàn),但尚不能達(dá)到腦梗死疾病病理改變;而單純疾病造模,則主要反映臨床病理變化,缺少與中醫(yī)理論的關(guān)聯(lián),尚不能完整體現(xiàn)中醫(yī)證候特征或與特定的中醫(yī)證候等同;采用復(fù)合因素(睡眠剝奪+腦梗死)建立的模型綜合了兩者的技術(shù)優(yōu)勢,與中醫(yī)理論緊密關(guān)聯(lián),與病證結(jié)合動(dòng)物模型的特征相符合,與臨床疾病發(fā)生發(fā)展的過程更接近,能夠完整體現(xiàn)中醫(yī)證候特征,有助于闡釋中醫(yī)證候的科學(xué)內(nèi)涵和理論基礎(chǔ)。上述氣虛、血瘀、疾病、能量代謝、病理觀察等多項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果的綜合分析,也證明復(fù)合因素(睡眠剝奪十腦梗死)造模優(yōu)于單純疾病造模和單純證候造模,是一種穩(wěn)定、可控且重復(fù)性較好的多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型。第二部分 多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證大鼠模型病理生理演化過程及益氣活血方干預(yù)的研究1.研究目的觀察采用復(fù)合因素建立的病證結(jié)合模型在不同時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)的變化,研究模型病理生理演化過程,并用益氣活血方進(jìn)行干預(yù),探討模型建立方法的穩(wěn)定性和可靠性。2.材料和方法將雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組,分別為正常組,假手術(shù)組,睡眠剝奪復(fù)合多發(fā)性腦梗死模型組,益氣活血方組。正常組:正常飲食、飲水,同時(shí)與假手術(shù)組同步按照10ml/kg灌胃蒸餾水,每天1次,連續(xù)4周,n=31;假手術(shù)組:僅切口、穿線,不注射熒光微球,術(shù)后開始灌胃蒸餾水,其他同正常組,n=31;睡眠剝奪復(fù)合多發(fā)性腦梗死組(睡奪+腦梗組):每天睡眠剝奪16h(每天16點(diǎn)至次日8點(diǎn)),睡眠剝奪1周后行多發(fā)性腦梗死手術(shù),術(shù)后繼續(xù)睡眠剝奪4周,并于術(shù)后開始每天按照10ml/kg灌胃蒸餾水,每天1次,連續(xù)4周,n=30;益氣活血方組:每天睡眠剝奪16h(每天16點(diǎn)至次日8點(diǎn)),1周后行多發(fā)性腦梗死手術(shù),術(shù)后繼續(xù)睡眠剝奪4周,并于術(shù)后開始每天按照10ml/kg灌胃益氣活血方(26g生藥/kg)1次,連續(xù)給藥4w,n=30。術(shù)后分三個(gè)時(shí)間點(diǎn)(術(shù)后48h、術(shù)后2周、術(shù)后4周)從每組隨機(jī)選取10只大鼠進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測定。每階段造模結(jié)束后檢測指標(biāo)和方法同第一部分實(shí)驗(yàn),新增LD、LDH、TXB2、6-keto-PGF1α.5-HT五項(xiàng)指標(biāo)測定。3.研究結(jié)果:(1)一般狀態(tài)觀察:正常組和假手術(shù)組大鼠三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的一般狀態(tài)良好,模型組和益氣活血方組大鼠三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)不同程度的精神萎靡,懶動(dòng)的狀態(tài),模型組大鼠隨造模時(shí)間延長情況愈加嚴(yán)重,益氣活血方組大鼠一般狀態(tài)較模型組有明顯改善。(2)氣虛指標(biāo):與假手術(shù)組比較,模型組體重、抓力、負(fù)重力竭游泳時(shí)間、自發(fā)活動(dòng)路程、脈搏幅度均顯著減少(P0.01);與模型組比較,益氣活血方組術(shù)后4周體重、抓力、負(fù)重力竭游泳時(shí)間、自發(fā)活動(dòng)路程、脈搏幅度均顯著上升(P0.05或P0.01)。(3)血瘀指標(biāo):①舌面圖像R、G、B值:與假手術(shù)組比較,模型組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)舌面圖像R、G、B值均顯著減少(P0.05或P0.01);與模型組比較,益氣活血方組術(shù)后48h舌面圖像RG、B值均無明顯差異,術(shù)后2周舌面圖像R值顯著增加(P0.01),G、B值無明顯差異,術(shù)后4周舌面圖像R、G、B值均顯著增加(P0.05)。②血液流變學(xué)指標(biāo):與假手術(shù)組比較,模型組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)在切變率5 s-1、60 s-1、150 s-1下的全血黏度均明顯增加(P0.05或P0.01);與模型組比較,益氣活血方組術(shù)后2周在切變率5 s-1、60 s-1下的全血黏度均顯著降低(P0.01),術(shù)后4周在切變率5 s-1下的全血黏度明顯降低(P0.05)。③凝血四項(xiàng)指標(biāo):與假手術(shù)組比較,模型組術(shù)后2周、4周PT、APTT、TT均明顯減少(P0.05或P0.01);與模型組比較,益氣活血方組術(shù)后2周、4周PT、TT均明顯增加(P0.05或P0.01)。(4)腦梗死疾病病理指標(biāo):①神經(jīng)功能缺損情況評分:模型組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損情況;與模型組比較,益氣活血方組術(shù)后48h和術(shù)后2w神經(jīng)功能缺損評分無明顯差異,術(shù)后4w神經(jīng)功能缺損情況評分有減少趨勢。②腦表觀與腦切片TTC染色觀察:模型組和益氣活血方組大鼠右半腦三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)熒光微球散狀分布,且有局部壞死,早期有水腫區(qū)域,益氣活血方組水腫、壞死程度輕于模型組;③腦組織病理及超微結(jié)構(gòu)觀察:通過腦組織HE染色和電鏡觀察可見,正常組和假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)正常,模型組腦組織結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的病理性改變,且隨著造模時(shí)間延長不斷加重,益氣活血方組腦組織結(jié)構(gòu)病變較模型組明顯減輕。(5)生化指標(biāo)測定:與假手術(shù)組比較,模型組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)腦皮層SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均明顯降低(P0.05或P0.01),LDH活性明顯升高(P0.01),腦皮層MDA、LD、血清TXB2含量均明顯增加(P0.01),血清6-keto-PGF1a、腦皮層5-HT含量均明顯減少(P0.05或P0.01);與模型組比較,益氣活血方組術(shù)后2周5-HT含量明顯增加(P0.05),術(shù)后4周Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均明顯升高(P0.05),LDH活性明顯降低(P0.01),LD、MDA、TXB2含量均明顯減少(P0.05 或P0.01),6-keto-PGF1α和 5-HT 含量均明顯增加(P0.05)。4.結(jié)論(1)采用睡眠剝奪復(fù)合腦梗死手術(shù),建立多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證大鼠模型,觀察并分析了模型發(fā)展不同時(shí)間點(diǎn)各項(xiàng)指標(biāo)的變化特點(diǎn),初步揭示了模型氣虛血瘀證候的演化過程及相關(guān)生物學(xué)基礎(chǔ)。(2)益氣活血方對多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證大鼠模型有較好療效,主要體現(xiàn)在對模型大鼠的一般表征、氣虛血瘀狀態(tài)、能量代謝障礙、血液流變性、凝血功能、腦組織病理改變等方面均有較好的改善作用,驗(yàn)證了所建立的病證結(jié)合模型的穩(wěn)定性和可靠性。綜上所述,本文比較了不同因素造模方法,明確了睡眠剝奪復(fù)合腦梗手術(shù)的方法適合于建立多發(fā)性腦梗死氣虛血瘀證大鼠模型,觀察并分析了模型發(fā)展不同時(shí)間點(diǎn)各項(xiàng)指標(biāo)的變化特點(diǎn),并利用益氣活血方進(jìn)行干預(yù),對所建立的病證結(jié)合模型的穩(wěn)定性和可靠性進(jìn)行了驗(yàn)證,初步揭示了模型氣虛血瘀證候的演化過程及生物學(xué)基礎(chǔ),為中藥新藥的研發(fā)和中藥復(fù)方功效的闡述提供了有價(jià)值的研究模型和手段。
[Abstract]:On the background of stroke, also known as stroke, it is one of the most serious diseases to human life and health threat. The investigation shows that every year in our country new stroke number about 2 million 500 thousand, and the trend was increasing year by year. The annual stroke deaths accounted for 22.45% of total deaths, a serious threat to human health, affecting the living standards of the people, and causing heavy economic burden to society and family. In the pathological type of stroke, cerebral infarction accounted for about 3/4 of the incidence of stroke in TCM; syndrome, Qi deficiency and blood stasis syndrome is the most common. So in cerebrovascular disease research should strengthen the studies focus on cerebral infarction of qi deficiency and blood stasis establishment of animal models of diseases is an important means to develop new drugs of traditional Chinese medicine and disease research. Currently, research often uses the method of multi factor superposition to establish cerebral infarction Qi deficiency and blood stasis syndrome with The rat model, although some progress has been made, but because of the lack of modeling method and evaluation system of standardization, and the interference factors lead to complex pathogenesis is not easy to explain, and natural disease state there is a certain gap, so it is often difficult to be recognized. This subject to multiple cerebral infarction of qi deficiency and blood stasis rats the model as the research object, the basic research on previous research on the improved and comparison, try to draw a stable model, and the model evaluation system to supplement and complete, combined with the national "973" research objectives and content, this model changes the formation of machine body and blood the related biological indicators of the research model and provide valuable means for Chinese herbal medicine and traditional Chinese medicine research. The first part describes the compound effect of multiple cerebral infarction of qi deficiency 琛，

本文編號：1772149