本文選題：廣州管圓線蟲(chóng) + 雌性成蟲(chóng)肌蛋白-　； 參考：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2013年10期

【摘要】：目的對(duì)廣州管圓線蟲(chóng)雌性成蟲(chóng)肌蛋白-1(Ac-fmp-1)基因的開(kāi)放讀碼框進(jìn)行克隆,分析序列結(jié)構(gòu)、功能特征及編碼蛋白的理化性質(zhì),并構(gòu)建體外表達(dá)載體。方法采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和T-A克隆方法克隆Ac-fmp-1基因的開(kāi)放讀碼框全長(zhǎng);運(yùn)用NCBI網(wǎng)站和ExPaSy等生物信息學(xué)在線工具分析Ac-fmp-1基因編碼序列及其編碼氨基酸的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)及功能;采用基因克隆技術(shù)定向克隆至原核表達(dá)載體pET-30a-c(+),構(gòu)建Ac-fmp-1基因重組表達(dá)質(zhì)粒。結(jié)果擴(kuò)增和克隆了廣州管圓線蟲(chóng)Ac-fmp-1基因開(kāi)放讀碼框序列,此序列大小為1 251bp,與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中Acfmp-1基因的編碼序列同源性為99.6%,編碼417個(gè)氨基酸。ProtParam預(yù)測(cè)該基因編碼蛋白在溶液中不穩(wěn)定、保守性差,未發(fā)現(xiàn)跨膜區(qū)域。PHD法二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)該蛋白質(zhì)分子為α-螺旋型,于氨基酸殘基346~404位點(diǎn)處含有一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu),Signal P軟件預(yù)測(cè)該蛋白分子無(wú)信號(hào)肽序列,具有較強(qiáng)的親水性。該基因編碼蛋白的氨基酸序列中,含有16個(gè)潛在的B細(xì)胞抗原表位。構(gòu)建的原核表達(dá)載體pET-Ac-fmp-1成功定向插入了Ac-fmp-1基因。結(jié)論成功擴(kuò)增和克隆了廣州管圓線蟲(chóng)Ac-fmp-1基因,編碼蛋白可能是廣州管圓線蟲(chóng)的重要抗原成分,可作為廣州管圓線蟲(chóng)病的疫苗候選分子和藥物靶標(biāo)。構(gòu)建了用于體外表達(dá)的原核表達(dá)載體,為進(jìn)行Ac-fmp-1功能研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to clone the open reading frame of myoprotein-1 (Ac-fmp-1) gene of female adult nematode Angiostrongylus andanalyze the sequence structure functional characteristics and physicochemical properties of the encoded protein and construct the expression vector in vitro.Methods the full-length open reading frame of Ac-fmp-1 gene was cloned by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and T-A cloning, and the physicochemical properties of the encoding sequence of Ac-fmp-1 gene and its encoded amino acids were analyzed by using bioinformatics tools such as NCBI website and ExPaSy.The structure and function were cloned into prokaryotic expression vector pET-30a-c (pET-30a-c) by gene cloning technique, and the recombinant expression plasmid of Ac-fmp-1 gene was constructed.Results the open reading frame sequence of Ac-fmp-1 gene of Angiostrongylus cantonensis was amplified and cloned. The size of the sequence was 1251 BP, which was 99.6 homology with the coding sequence of Acfmp-1 gene in GenBank database. ProtParam predicted that the encoding protein of this gene was unstable in solution.The second structure of the protein was predicted to be 偽-helical by transmembrane region. PhD method, and a zinc finger structure signal P software was used to predict the signal peptide sequence of the protein molecule at the site of 346 ~ (404) amino acid residues. The protein had strong hydrophilicity.The amino acid sequence of the gene encoding protein contains 16 potential B cell epitopes.The prokaryotic expression vector pET-Ac-fmp-1 was successfully inserted into Ac-fmp-1 gene.Conclusion the Ac-fmp-1 gene of Angiostrongylus cantonensis was successfully amplified and cloned. The encoded protein may be an important antigen component of Angiostrongylus cantonensis and can be used as a vaccine candidate and drug target for Angiostrongylus cantonensis.The prokaryotic expression vector was constructed for in vitro expression, which laid a foundation for the study of Ac-fmp-1 function.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳市婦幼保健院中心實(shí)驗(yàn)室;中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)教研室;
【分類(lèi)號(hào)】：R383.19

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1760944