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PAX2慢病毒表達載體的制備及鑒定

發(fā)布時間:2018-04-14 07:12

  本文選題:PAX基因 + 慢病毒載體; 參考:《現(xiàn)代預防醫(yī)學》2013年15期


【摘要】:目的構建大鼠PAX2慢病毒表達載體,以期在大鼠腎臟中高效、穩(wěn)定表達。方法設計引物引入AgeⅠ酶切位點,使用PCR方法從質粒pcDNA3.1-PAX2中擴增小鼠PAX2基因的編碼區(qū)序列,對所擴增出的目的片段回收純化。用In-Fusion技術將AgeⅠ內切酶消化后目的片段交換連接入AgeI酶切的pGC-FU載體,構建PAX2慢病毒表達載體pGC-FU-PAX2。酶切驗證并測序正確后,將質粒pGC-FU-PAX2與慢病毒輔助包裝載體共轉染293T細胞,Western-blot驗證PAX2在轉染293T細胞中表達。結果通過PCR擴增獲得了PAX2基因,將PAX2克隆到慢病毒轉移質粒pGC-FU中,并在293T細胞中包裝產(chǎn)生慢病毒顆粒。結論成功構建了PAX2慢病毒表達載體,為進一步從分子水平探討PAX2功能奠定了基礎。
[Abstract]:Objective to construct the expression vector of rat PAX2 lentivirus in order to express it efficiently and stably in rat kidney.Methods Primer was designed to introduce Age 鈪,

本文編號:1748235

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