本文選題：實驗性自發(fā)性腦脊髓炎　切入點：多發(fā)性硬化　出處：《西南交通大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:本研究通過片仔癀灌胃治療多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)模型鼠一實驗性自發(fā)性免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE))大鼠模型和小鼠模型,并對其進行療效評價研究及初步探索可能的治療機制,為臨床片仔癀用于治療MS提供實驗依據(jù)。方法:1.雄性Lewis大鼠左后足墊皮下注射豚鼠髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)誘導急性EAE模型。隨機分為正常組(Normal)、模型組(Model)、醋酸潑尼松組(PA,5 mg/kg/d)、片仔癀低劑量組(PZH-L,0.054 g/kg/d)、片仔癀中劑量組(PZH-M,0.162 g/kg/d)、片仔癀高劑量組(PZH-M,0.486 g/kg/d),于免疫10天后灌胃給藥21天,非藥物組給予等量雙蒸水干預。藥物治療期間,每天對小鼠體重和臨床癥狀進行觀察和記錄,進行神經(jīng)功能評分。蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)和髓鞘染色法(luxolfastblue,LFB)檢測大鼠大腦、腦干和脊髓組織的病理變化;ELISA法檢測血清中炎癥因子IL-17A、IL-23的含量變化和CCL3和CCL5趨化因子的表達水平。2.采用髓鞘磷脂蛋白 139-151(proteolipid protein 139-151,PLP139-151)多肽免疫雌性SJL/J小鼠建立穩(wěn)定的復發(fā)-緩解型EAE小鼠模型。小鼠隨機分為正常組(Normal)、模型組(Model)、片仔癀低劑量組(PZH-L,0.078 g/kg/d)、片仔癀中劑量組(PZH-M,0.234 g/kg/d)、片仔癀高劑量組(PZH-H,0.702 g/kg/d)和醋酸潑尼松組(PA,7 mg/kg/d)共六個小組,每組10只小鼠。于免疫后第10天(發(fā)病點)開始每天以0.2 ml/20g的灌胃體積,灌胃給藥60天,空白組和模型組給予等量的雙蒸水干預。藥物治療結(jié)束后,采用LFB和HE染色法觀察小鼠髓鞘脫失和炎癥病理變化情況;選用免疫組織化學法檢測大腦中MBP蛋白含量和少突膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)錄因子2(Oligodendrocyte transcription factor2,olig2)含量;使用 ELISA 法檢測小鼠血清中 IL-17A、TNF-α、IL-1β 和 IFN-γ炎性細胞因子的表達;利用細胞流式術(shù)檢測CNS和脾中Th1和Th17細胞亞群的數(shù)量變化;運用Western blot法檢測小鼠大腦中IKBα和P65的含量以及STAT1、STAT3、STAT4、P65和IKBα的磷酸化水平;采用Real-timePCR法檢測小鼠腦中與Th1和Th17細胞相關(guān)的T-bet和ROR-γt轉(zhuǎn)錄因子的表達及IL-12a、IFN-γ、IL-17A和IL-22細胞因子的mRNA相對表達水平。結(jié)果:1.片仔癀對EAE大鼠的療效結(jié)果:HE染色結(jié)果顯示,模型組大鼠大腦、腦干和脊髓中可見小血管周圍炎性細胞浸潤并形成典型的"袖套狀"改變,各治療組大鼠這三個部位病理變化有不同程度的減輕,小靜脈血管周圍袖套樣淋巴細胞浸潤減少;ELISA檢測顯示,模型組大鼠血清中細胞因子IL-17A、IL-23、CCL3和CCL5表達顯著升高,醋酸潑尼松組和片仔癀各劑量組這四個因子的表達明顯降低,與模型組相比有顯著性差異(P0.05 或P0.01)。2.片仔癀對EAE小鼠的療效結(jié)果:和模型組相比,小鼠臨床癥狀和神經(jīng)功能評分顯示片仔癀各劑量組和激素組能有效緩解小鼠疾病嚴重程度,減少復發(fā)次數(shù)(P0.05或P0.01);組織病理學結(jié)果表明,模型組小鼠有明顯的炎性細胞血管"袖套樣"浸潤以及脊髓脫髓鞘等病變損傷,片仔癀能夠有效減輕炎癥反應(yīng)和病理損傷(P0.05或P0.01);免疫組化結(jié)果顯示,片仔癀藥物治療組能夠增強小鼠腦中MBP和olig2陽性細胞信號(P0.05或P0.01);ELISA結(jié)果亦表明,片仔癀各治療組能夠大幅度抑制小鼠血清中IL-1β、IL-17A、TNF-α和IFN-γ細胞因子的表達(P0.05或P0.01)。3.片仔癀治療EAE小鼠的機制研究結(jié)果:細胞流式結(jié)果表明,和模型組相比,片仔癀能分別降低CNS和脾中Th1和Th17細胞數(shù)量,具有顯著性差異(P0.05或P0.01);Western Blot結(jié)果表明片仔癀能減少磷酸化的STAT1、STAT3、STAT4、P65和IKBα的蛋白表達水平(P0.05或P0.01);Real-time PCR結(jié)果顯示,片仔癀能降低小鼠大腦中轉(zhuǎn)錄因子T-bet和ROR-γt的mRNA相對表達水平(P0.05或P0.01),以及能減少細胞因子IFN-γ、IL-12a、IL-17A和IL-22的mRNA的表達(P0.05或P0.01)。結(jié)論:1.片仔癀可以通過抑制炎癥對EAE大鼠起到一定的治療作用;2.片仔癀可通過減輕炎癥和減少髓鞘脫失等對EAE小鼠起到一定的治療作用;3.片仔癀對EAE小鼠的治療作用,可能通過調(diào)控Th1和Th17細胞的分化和活性發(fā)揮作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：1727426