本文選題：實(shí)驗(yàn)性自發(fā)性腦脊髓炎　切入點(diǎn)：多發(fā)性硬化　出處：《西南交通大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:本研究通過(guò)片仔癀灌胃治療多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)模型鼠一實(shí)驗(yàn)性自發(fā)性免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE))大鼠模型和小鼠模型,并對(duì)其進(jìn)行療效評(píng)價(jià)研究及初步探索可能的治療機(jī)制,為臨床片仔癀用于治療MS提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.雄性Lewis大鼠左后足墊皮下注射豚鼠髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)誘導(dǎo)急性EAE模型。隨機(jī)分為正常組(Normal)、模型組(Model)、醋酸潑尼松組(PA,5 mg/kg/d)、片仔癀低劑量組(PZH-L,0.054 g/kg/d)、片仔癀中劑量組(PZH-M,0.162 g/kg/d)、片仔癀高劑量組(PZH-M,0.486 g/kg/d),于免疫10天后灌胃給藥21天,非藥物組給予等量雙蒸水干預(yù)。藥物治療期間,每天對(duì)小鼠體重和臨床癥狀進(jìn)行觀察和記錄,進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)和髓鞘染色法(luxolfastblue,LFB)檢測(cè)大鼠大腦、腦干和脊髓組織的病理變化;ELISA法檢測(cè)血清中炎癥因子IL-17A、IL-23的含量變化和CCL3和CCL5趨化因子的表達(dá)水平。2.采用髓鞘磷脂蛋白 139-151(proteolipid protein 139-151,PLP139-151)多肽免疫雌性SJL/J小鼠建立穩(wěn)定的復(fù)發(fā)-緩解型EAE小鼠模型。小鼠隨機(jī)分為正常組(Normal)、模型組(Model)、片仔癀低劑量組(PZH-L,0.078 g/kg/d)、片仔癀中劑量組(PZH-M,0.234 g/kg/d)、片仔癀高劑量組(PZH-H,0.702 g/kg/d)和醋酸潑尼松組(PA,7 mg/kg/d)共六個(gè)小組,每組10只小鼠。于免疫后第10天(發(fā)病點(diǎn))開(kāi)始每天以0.2 ml/20g的灌胃體積,灌胃給藥60天,空白組和模型組給予等量的雙蒸水干預(yù)。藥物治療結(jié)束后,采用LFB和HE染色法觀察小鼠髓鞘脫失和炎癥病理變化情況;選用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大腦中MBP蛋白含量和少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2(Oligodendrocyte transcription factor2,olig2)含量;使用 ELISA 法檢測(cè)小鼠血清中 IL-17A、TNF-α、IL-1β 和 IFN-γ炎性細(xì)胞因子的表達(dá);利用細(xì)胞流式術(shù)檢測(cè)CNS和脾中Th1和Th17細(xì)胞亞群的數(shù)量變化;運(yùn)用Western blot法檢測(cè)小鼠大腦中IKBα和P65的含量以及STAT1、STAT3、STAT4、P65和IKBα的磷酸化水平;采用Real-timePCR法檢測(cè)小鼠腦中與Th1和Th17細(xì)胞相關(guān)的T-bet和ROR-γt轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)及IL-12a、IFN-γ、IL-17A和IL-22細(xì)胞因子的mRNA相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果:1.片仔癀對(duì)EAE大鼠的療效結(jié)果:HE染色結(jié)果顯示,模型組大鼠大腦、腦干和脊髓中可見(jiàn)小血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)并形成典型的"袖套狀"改變,各治療組大鼠這三個(gè)部位病理變化有不同程度的減輕,小靜脈血管周圍袖套樣淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少;ELISA檢測(cè)顯示,模型組大鼠血清中細(xì)胞因子IL-17A、IL-23、CCL3和CCL5表達(dá)顯著升高,醋酸潑尼松組和片仔癀各劑量組這四個(gè)因子的表達(dá)明顯降低,與模型組相比有顯著性差異(P0.05 或P0.01)。2.片仔癀對(duì)EAE小鼠的療效結(jié)果:和模型組相比,小鼠臨床癥狀和神經(jīng)功能評(píng)分顯示片仔癀各劑量組和激素組能有效緩解小鼠疾病嚴(yán)重程度,減少?gòu)?fù)發(fā)次數(shù)(P0.05或P0.01);組織病理學(xué)結(jié)果表明,模型組小鼠有明顯的炎性細(xì)胞血管"袖套樣"浸潤(rùn)以及脊髓脫髓鞘等病變損傷,片仔癀能夠有效減輕炎癥反應(yīng)和病理?yè)p傷(P0.05或P0.01);免疫組化結(jié)果顯示,片仔癀藥物治療組能夠增強(qiáng)小鼠腦中MBP和olig2陽(yáng)性細(xì)胞信號(hào)(P0.05或P0.01);ELISA結(jié)果亦表明,片仔癀各治療組能夠大幅度抑制小鼠血清中IL-1β、IL-17A、TNF-α和IFN-γ細(xì)胞因子的表達(dá)(P0.05或P0.01)。3.片仔癀治療EAE小鼠的機(jī)制研究結(jié)果:細(xì)胞流式結(jié)果表明,和模型組相比,片仔癀能分別降低CNS和脾中Th1和Th17細(xì)胞數(shù)量,具有顯著性差異(P0.05或P0.01);Western Blot結(jié)果表明片仔癀能減少磷酸化的STAT1、STAT3、STAT4、P65和IKBα的蛋白表達(dá)水平(P0.05或P0.01);Real-time PCR結(jié)果顯示,片仔癀能降低小鼠大腦中轉(zhuǎn)錄因子T-bet和ROR-γt的mRNA相對(duì)表達(dá)水平(P0.05或P0.01),以及能減少細(xì)胞因子IFN-γ、IL-12a、IL-17A和IL-22的mRNA的表達(dá)(P0.05或P0.01)。結(jié)論:1.片仔癀可以通過(guò)抑制炎癥對(duì)EAE大鼠起到一定的治療作用;2.片仔癀可通過(guò)減輕炎癥和減少髓鞘脫失等對(duì)EAE小鼠起到一定的治療作用;3.片仔癀對(duì)EAE小鼠的治療作用,可能通過(guò)調(diào)控Th1和Th17細(xì)胞的分化和活性發(fā)揮作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

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本文編號(hào)：1727426