本文選題：克隆測序　切入點(diǎn)：流感病毒　出處：《中國當(dāng)代兒科雜志》2013年02期

【摘要】：目的結(jié)合RT-PCR病毒載量檢測、克隆測序基因比對以及病理改變鑒定甲型流感病毒(influenzavirus,IV)鼠肺適應(yīng)株(FM1株)誘導(dǎo)的小鼠急性肺炎模型,為急性肺炎模型提供科學(xué)的鑒定方案。方法以FM1株滴鼻誘導(dǎo)昆明小鼠急性肺炎,分別于第3、5、7天取小鼠肺臟,以RT-PCR法檢測IV病毒載量,并通過質(zhì)�？寺y定cDNA序列;同時(shí)觀察小鼠肺臟病理改變。結(jié)果正常組小鼠肺組織的肺泡、肺泡囊和肺泡隔形態(tài)完整,周圍血管未見炎癥細(xì)胞浸潤;模型組在感染IV后第3、5、7天均見肺泡、肺泡囊、肺泡管、肺泡隔等結(jié)構(gòu)破壞,肺泡間隔增厚,細(xì)支氣管壁增厚,大量炎癥細(xì)胞浸潤,肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張,可見大量紅細(xì)胞。與正常組比較,模型組在不同時(shí)間點(diǎn)的病理變化程度均有顯著性差異(P0.01)。不同時(shí)間點(diǎn)模型組小鼠肺組織中均可檢測到IV病毒核酸,且不同時(shí)間點(diǎn)小鼠肺組織的病變程度與病毒載量呈正相關(guān)(P0.01)。經(jīng)測序比對發(fā)現(xiàn),IV感染小鼠肺組織中RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與已知IV cDNA序列相應(yīng)片段吻合度高達(dá)99.1%。結(jié)論克隆測序基因比對法可鑒定FM1株誘導(dǎo)的小鼠急性肺炎模型。
[Abstract]:Objective to identify the mouse acute pneumonia model induced by influenza A virus influenzavirusIV-1 strain combined with RT-PCR viral load detection, cloning and sequencing gene alignment and pathological changes, and to provide a scientific identification scheme for acute pneumonia model.Methods Acute pneumonia of Kunming mice was induced by nasal drip of FM1 strain. The lungs of mice were collected on the 7th day of the 3rd day, the viral load of IV virus was detected by RT-PCR method, the cDNA sequence was determined by plasmid clone, and the pathological changes of mouse lungs were observed at the same time.The alveolar septum thickened, the bronchiole wall thickened, a large number of inflammatory cells infiltrated, the alveolar wall capillary dilated, a large number of red blood cells were observed.Compared with the normal group, the pathological changes of the model group were significantly different at different time points (P 0.01).IV virus nucleic acid could be detected in the lung tissue of mice in different time point groups, and the pathological degree of lung tissue was positively correlated with the viral load at different time points (P 0.01).The results of sequencing showed that the RT-PCR amplification products in the lung tissues of mice infected with IV were up to 99.1% consistent with the corresponding fragments of the known IV cDNA sequences.Conclusion cloning and sequencing gene alignment method can be used to identify mouse acute pneumonia model induced by FM1 strain.
【作者單位】： 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81072975)
【分類號】：R-332

【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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6 宋淑t

本文編號：1723370