發(fā)布時間：2018-04-05 17:22

  本文選題：副溶血弧菌　切入點：毒力因子　出處：《浙江理工大學》2016年碩士論文

【摘要】：副溶血弧菌是一種全球性傳播的病原菌,感染時能引發(fā)急性腸胃炎、傷口感染,甚至誘發(fā)敗血癥。研究顯示該菌毒力因子包括溶血毒素、粘附素、Ⅲ型及Ⅵ型分泌系統(tǒng)等,其中Ⅲ型分泌系統(tǒng)及其分泌的效應蛋白與其致病性密切相關。由染色體1編碼的Ⅲ型分泌系統(tǒng)T3SS1分泌的效應蛋白主要通過誘導細胞自噬、變圓和裂解這一系列過程來發(fā)揮細胞毒性作用;染色體2編碼的Ⅲ型分泌系統(tǒng)T3SS2分泌的效應蛋白主要通過破壞細胞骨架和操控細胞信號傳導等發(fā)揮腸毒性作用。目前針對Ⅲ型分泌系統(tǒng)T3SS2的研究引起國內外學者的廣泛關注,由于T3SS2有80個相關基因編碼在VP-PAI毒力島上,其中僅少數(shù)幾個蛋白得到研究,因此本實驗從中選出幾個新型的效應蛋白進行研究。首先利用生物信息學技術從T3SS2相關VP-PAI上篩選出VPA1324和VPA1360兩種基因,通過構建兩種基因的重組表達載體,誘導表達并純化蛋白,然后免疫小鼠獲得相應抗血清。通過Western blot和RT-PCR兩種方法驗證在膽鹽作用下VPA1324和VPA1360基因轉錄表達情況,結果顯示VPA1324和VPA1360蛋白是T3SS2相關的分泌蛋白。其中VPA1324經(jīng)生物信息學分析可能為二鳥苷酸磷酸二酯酶。為此,以c-di-GMP為底物,利用高效液相色譜法檢測VPA1324蛋白酶活性,結果表明VPA1324可降解c-di-GMP,具有磷酸二酯酶活性。構建該基因的重組質粒pEGFP-VPA1324-C1并轉染至Hela和Caco-2細胞中,發(fā)現(xiàn)VPA1324的表達導致細胞出現(xiàn)皺縮,通過Annexin V-FITC/PI雙染色和Hoechst 33342染色分析,表明VPA1324可導致細胞發(fā)生凋亡。綜上所述,VPA1324和VPA1360蛋白是T3SS2分泌的效應蛋白,VPA1324為一種磷酸二酯酶,能促使細胞凋亡。新效應蛋白的研究不僅有助于我們深入理解病原菌的毒力及感染作用機制,同時為真核生物本身的作用機制提供了獨特的視角。
[Abstract]:Vibrio parahaemolyticus is a globally transmitted pathogen that can cause acute gastroenteritis, wound infection and even septicemia.The virulence factors include hemolytic toxin, adhesin, type 鈪，

本文編號：1715761