本文選題：再狹窄　切入點：新生內(nèi)膜增殖　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:本實驗通過制備新西蘭兔髂動脈的再狹窄模型,觀察動物模型體內(nèi)SO2的表達(dá)水平,以及髂動脈的病理改變,并加用SO2外源性供體Na2SO3/Na HSO3,以探討SO2在再狹窄發(fā)生及發(fā)展過程中的變化及其與再狹窄的可能內(nèi)在關(guān)聯(lián)及其對PCI術(shù)后再狹窄的可能的防治作用。研究方法:1、制備球囊損傷致髂動脈再狹窄模型:將30只新西蘭雄兔,隨機分成三組,即正常對照組、再狹窄模型組及SO2干預(yù)組。適應(yīng)性飼喂7天普飼后,取后兩組新西蘭兔實施球囊損傷術(shù),術(shù)后連續(xù)飼喂再狹窄模型組及SO2干預(yù)組高脂飼料4周,再次對再狹窄模型組及SO2干預(yù)組行球囊損傷術(shù),手術(shù)后繼續(xù)飼喂再狹窄模型組及SO2干預(yù)組高脂飼料,術(shù)后第3天SO2干預(yù)組開始腹腔注射Na2SO3/Na HSO3新鮮混合液(摩爾比Na2SO3:Na HSO3=3:1,溶于1 mo L/L的9 g/L鹽水中,p H 7.4,32.85mg/kg·d)。4周后處死實驗新西蘭兔,處死前抽取靜脈血30ml以測定各項指標(biāo),處死后留取髂動脈標(biāo)本。2、靜脈血處理:所有靜脈血標(biāo)本均測取谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、極低密度脂蛋白(VLDL)、C反應(yīng)蛋白(CRP)含量,取血清測取SO2、NO、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)濃度。3、標(biāo)本處理:留取的雙側(cè)髂動脈標(biāo)本進(jìn)行HE及免疫組化染色處理;采用RT-PCR技術(shù)半定量測定髂動脈組織勻漿中GOT1及GOT2 m RNA的表達(dá)水平;于-80℃冰箱中凍存剩余血管組織。結(jié)果:采用本造模方法后,再狹窄模型組及SO2干預(yù)組的新西蘭兔存活16只,存活率80%,新西蘭兔處死后均可以觀察到動脈內(nèi)膜的增生,造模成功。1、血清學(xué)指標(biāo):再狹窄模型組及SO2干預(yù)組較正常對照組GOT水平下降(p0.05),再狹窄模型組低于SO2干預(yù)組(p0.05);再狹窄模型組及SO2干預(yù)組較正常對照組CHO、HDL、LDL、VLDL、CRP水平升高(p0.05),于CRP指標(biāo)SO2干預(yù)組低于再狹窄模型組(p0.05),于CHO、HDL、LDL、VLDL指標(biāo)SO2干預(yù)組略低于再狹窄模型組,無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05);再狹窄模型組與SO2干預(yù)組較正常對照組相GPT與TG略有增加,但無顯著差異(p0.05)。血清SO2含量,SO2干預(yù)組高于再狹窄模型組(p0.05),較正常對照組略增高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);血清NO和e NOS含量再狹窄模型組低于SO2干預(yù)組及正常對照組(p0.05,p0.05),SO2干預(yù)組低于正常對照組(p0.05);TNOS含量再狹窄模型組高于SO2干預(yù)組及正常對照組(p0.05,p0.05);SO2干預(yù)組高于正常對照組(p0.05);MDA含量再狹窄模型組高于SO2干預(yù)組及正常對照組(p0.05,p0.05),SO2干預(yù)組高于正常對照組(p0.05);SOD含量再狹窄模型組低于SO2干預(yù)組及正常對照組(p0.05,p0.05),SO2干預(yù)組低于正常對照組(p0.05)。2、組織學(xué)變化:正常對照組的血管管壁質(zhì)地柔軟,呈粉紅色,HE染色顯示內(nèi)膜主要成分為單層內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)彈力板,中膜平滑肌細(xì)胞環(huán)繞管腔規(guī)則排列;再狹窄模型組血管管壁呈白色,質(zhì)堅韌且厚度增加,血管管腔內(nèi)徑變窄,HE染色表現(xiàn)為血管內(nèi)膜明顯增厚,其下含大量增生的血管平滑肌細(xì)胞,內(nèi)彈力板斷裂,中膜處血管平滑肌細(xì)胞大量增生。SO2干預(yù)組血管質(zhì)地稍軟且管腔增大,管壁粉白色,HE染色也有不同程度的內(nèi)膜增厚,較多平滑肌細(xì)胞包含其中,內(nèi)彈力板較完整,中膜亦有增生的血管平滑肌細(xì)胞,但較再狹窄模型組其管腔狹窄程度及內(nèi)膜增生程度降低。通過免疫組化a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)染色提示血管平滑肌細(xì)胞是增生內(nèi)膜的主要細(xì)胞組分。在低倍顯微鏡觀察測量三組新生內(nèi)膜的厚度:與正常對照組(2.9458±0.1646)對比,再狹窄模型組(216.9599±63.7715)、SO2干預(yù)組(88.3928±22.8663)血管內(nèi)膜明顯增厚(p0.05),SO2干預(yù)組內(nèi)膜較再狹窄模型組變薄(p0.05)。PCNA染色顯示SO2干預(yù)組(20.57±4.07)及再狹窄模型組(41.74±6.52)表達(dá)明顯高于正常對照組(14.17±3.65)(p0.05),而再狹窄模型組與SO2干預(yù)組對比表達(dá)明顯增高(p0.05)。3、RT-PCR:GOT1及GOT2m RNA表達(dá)水平在再狹窄模型組顯著高于其他兩組(p值均0.05);SO2干預(yù)組GOT1m RNA表達(dá)量略低于空白對照組,但無顯著差異(p0.05),而GOT2m RNA表達(dá)量則降低(p0.05)。結(jié)論:1、本研究采用聯(lián)合高脂飼料和兔髂動脈二次球囊損傷方法可成功復(fù)制再狹窄模型,縮短建模周期,可行性高。2、再狹窄的可能發(fā)生機制為:PCI術(shù)后致血管內(nèi)皮受損,致e NOS活性降低,NO生成量減少;內(nèi)皮抗氧化還原能力受損,SOD活性或生成降低;內(nèi)皮受損處發(fā)生炎癥反應(yīng)并釋放一系列炎癥因子。NO含量下降、SOD活性的降低及炎癥因子的釋放進(jìn)而引起細(xì)胞間信息、能量及物質(zhì)交換增加,VSMC表型改變、增殖遷移,促進(jìn)以VSMC為主要細(xì)胞組分的新生內(nèi)膜增殖。同時SOD活性降低,以及i NOS生成增加,可引起機體氧自由基數(shù)目增多,脂質(zhì)過氧化反應(yīng)加強,MDA等脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物生成增多并加重內(nèi)皮細(xì)胞損傷,最終導(dǎo)致了再狹窄發(fā)生。而SO2可能通過提高e NOS活性,增加NO的釋放;增加機體SOD的含量,減少i NOS生成,降低MDA水平,抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)發(fā)生;抑制血管內(nèi)皮處炎癥反應(yīng)發(fā)生來抑制VSMC增殖、遷移及新生內(nèi)膜增殖,從而對介入術(shù)后再狹窄的發(fā)生起到一定的防治作用。
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本文編號：1704709