發(fā)布時間：2018-03-31 07:13

  本文選題：幼齡大鼠　切入點：免疫抑制　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學》2017年博士論文

【摘要】：由于幼齡個體與成年個體在藥物代謝和藥效方面不完全一致,使用成年動物模型獲得的數(shù)據(jù)不足以支持幼齡個體用藥評價。如今各國藥物監(jiān)管機構(gòu)均推薦使用幼齡動物模型來研究和評價低年齡個體用藥。為緩解幼齡動物模型的匱乏,本研究預期建立一個4周齡幼齡大鼠環(huán)磷酰胺免疫抑制模型,用于支持幼齡個體免疫調(diào)節(jié)藥物開發(fā)評價工作。研究采用血液學、流式細胞學、免疫組織化學、組織病理學、Western Blot和RT-PCR等技術(shù)方法,首先根據(jù)模型大鼠臨床表現(xiàn)、外周血細胞計數(shù)和胸腺系數(shù)變化探索建模條件。其次,通過對體重、外周血細胞數(shù)量、淋巴細胞亞群、免疫器官(脾臟、胸腺和淋巴結(jié))、脾臟中CDKN1A因子蛋白表達量和基因相對表達量、腸道黏膜免疫指標等檢測結(jié)果變化的分析,總結(jié)模型大鼠免疫指標的變化并與成年大鼠比較免疫變化的區(qū)別。最后,通過陽性藥對模型進行驗證和應用。研究獲得以下結(jié)果:通過體重、外周血細胞計數(shù)和胸腺臟器系數(shù)三項指標篩選建模條件,確認環(huán)磷酰胺灌胃30 mg/kg隔日共2次為最佳建模條件。幼齡大鼠表現(xiàn)出明顯免疫抑制和體重降低,且未見幼鼠死亡和其他嚴重副反應。免疫抑制模型建立后,CYP模型組4周齡幼齡大鼠與對照組相比,臨床表現(xiàn)正常;生長發(fā)育顯著抑制;外周血細胞數(shù)量如白細胞總數(shù)、嗜中性粒細胞和淋巴細胞數(shù)顯著降低;淋巴細胞各亞型均嚴重抑制,其中B淋巴細胞降低比例最高;CDKN1A因子上調(diào);胸腺、骨髓均表現(xiàn)顯著抑制;腸道黏膜免疫方面,腸道sIgA分泌減少、派氏結(jié)數(shù)量降低、上皮內(nèi)淋巴細胞數(shù)量減少、杯狀細胞數(shù)量明顯降低;變化差異具有統(tǒng)計學意義且?guī)缀跷匆姼弊饔�。與成年大鼠相比較,免疫相關(guān)指標總體降速快且幅度大,恢復慢且程度低。使用G-CSF和匹多莫德作為陽性藥對模型進行應用和驗證。G-CSF給藥組體重較模型組升高;表現(xiàn)出包括嗜中性粒細胞數(shù)和單核細胞等顯著的粒細胞提升作用;顯著提升脾臟臟器系數(shù),增加派氏結(jié)數(shù)量;表現(xiàn)極強的NK細胞提升作用;降低CDKN1A基因表達量;對淋巴細胞促進作用有限。匹多莫德給藥組體重較模型組升高;全面提升白細胞數(shù)量;對T、B、NK均有促進作用,且對NK細胞促進作用明顯;CDKN1A基因表達量降低。模型通過驗證,可以正確反應出G-CSF和匹多莫德免疫增強作用并與文獻報道相符。本研究首次使用4周齡SD大鼠成功建立環(huán)磷酰胺誘導的免疫抑制幼齡動物模型。在幼齡大鼠中發(fā)現(xiàn)環(huán)磷酰胺同樣通過上調(diào)細胞周期因子CDKN1A影響細胞周期、終止免疫系統(tǒng)細胞增值而引起免疫抑制的機制。研究中較系統(tǒng)的觀察了機體固有免疫和獲得性免疫的免疫抑制表現(xiàn)以及恢復情況。在同劑量條件下與成年大鼠相比較,幼齡大鼠免疫抑制程度強,恢復能力弱。最后初步系統(tǒng)評價模型大鼠腸道黏膜免疫結(jié)構(gòu)及功能的變化,為黏膜免疫調(diào)節(jié)劑的研究提供支持。通過本研究,我們建立一個適用于幼齡個體免疫調(diào)節(jié)藥物評價的幼齡大鼠環(huán)磷酰胺免疫抑制模型。
[Abstract]:In order to alleviate the deficiency of juvenile animal models , it is expected to establish a 4 - week - old rat model of cyclophosphamide immunosuppression to study and evaluate the immune changes of young rats . In this study , we established a model of cyclophosphamide - induced immunosuppression in young rats .

【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R-332;R965

【參考文獻】

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7 王雯s，

本文編號：1689703