本文選題：新生隱球菌　切入點(diǎn)：絲氨酸蛋白酶　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：新生隱球菌是一種環(huán)境致病菌,在艾滋病患者和CD4+T細(xì)胞缺陷者中常見(jiàn),易導(dǎo)致隱球菌腦膜炎。艾滋病感染患者中每年有100萬(wàn)人新增隱球菌患者,大約有62.5萬(wàn)人死于隱球菌腦膜炎相關(guān)疾病。37℃生長(zhǎng),莢膜,黑色素,尿素酶等是目前已知的新生隱球菌的毒力因子。研究新生隱球菌的毒力因子以及它們之間如何相互作用,對(duì)于控制隱球菌感染的蔓延具有重要意義。絲氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶是常見(jiàn)的蛋白水解酶類,廣泛的分布在自然界的生物中,包括病毒、細(xì)菌、真菌和動(dòng)植物。天冬氨酸蛋白酶參與很多重要生理過(guò)程。在動(dòng)物中,腎素是一種天冬氨酸蛋白酶,其可以通過(guò)腎素-血管緊張素系統(tǒng)調(diào)節(jié)血壓;逆轉(zhuǎn)錄病毒天冬氨酸蛋白酶,如HIV蛋白酶,是病毒顆粒的成熟必不可少的,其抑制劑是治療AIDS成熟的藥物;白色念珠菌分泌的天冬氨酸蛋白酶參與粘附過(guò)程和組織的滲透,并與宿主的免疫系統(tǒng)的相互作用。絲氨酸蛋白酶的生理功能包括血液凝結(jié),細(xì)胞和體液免疫,纖維蛋白溶解,受精,胚胎發(fā)育,蛋白質(zhì)加工和組織。在皮膚癬菌中,絲氨酸蛋白酶可能參與皮膚癬菌對(duì)宿主的粘附過(guò)程。新生隱球菌蛋白酶被認(rèn)為是隱球菌的潛在毒力因子,但是其在隱球菌感染中的作用和地位還未明確。目前已有隱球菌外分泌的蛋白酶被鑒定和分離出來(lái)。最近的研究表明隱球菌的一種金屬蛋白酶Mpr1在隱球菌通過(guò)血腦屏障過(guò)程中扮演著重要的角色。新生隱球菌絲氨酸蛋白酶被證實(shí)可以分解纖維連接蛋白,可能在隱球菌通過(guò)血腦屏障中發(fā)揮作用。在本文的研究中,我們首先通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序比較了新生隱球菌在體內(nèi)腦脊液,體外腦脊液及體外YPD轉(zhuǎn)錄組表達(dá)的不同,結(jié)合MEROPS數(shù)據(jù)庫(kù),篩選出可能在新生隱球菌感染中發(fā)揮作用的6個(gè)絲氨酸蛋白酶編碼基因和5個(gè)天冬氨酸蛋白酶編碼基因。為了研究這11個(gè)基因在隱球菌感染中的作用,我們通過(guò)Cre-Lox P系統(tǒng)構(gòu)建了天冬氨酸蛋白酶和絲氨酸蛋白酶的單基因和多基因缺陷株:ser1△,ser2△,ser3△,ser4△,ser5△,ser6△,ser M2△,ser M3△,ser M4△,ser M5△,ser M5△+SER3,ser M5△+SER5,asp1△,asp2△,asp3△,asp4△,asp5△,asp M2△,asp M3△,asp M4△,asp M5△。通過(guò)體外的應(yīng)激應(yīng)答實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)天冬氨酸蛋白酶缺陷株的表型缺陷并不明顯,于是我們將焦點(diǎn)集中在絲氨酸蛋白酶。我們發(fā)現(xiàn)絲氨酸蛋白酶Ser5參與新生隱球菌黑色素的誘導(dǎo)和生成。ser M5△多基因缺陷株對(duì)體外細(xì)胞壁壓力敏感,其基因缺陷可能影響細(xì)胞壁的完整性,同時(shí)ser M5△表現(xiàn)出尿素酶活性和蛋白酶活性下降。但是長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)顯示ser M5△并沒(méi)有完全丟失尿素酶和蛋白酶活性。在小鼠尾靜脈感染中,ser M5△在腦部的菌荷量顯著下降,可能與其通過(guò)血腦屏障障礙有關(guān)。在小鼠吸入模型中,ser M5△感染小鼠的生存率并沒(méi)有明顯的延長(zhǎng),可能與ser M5?并沒(méi)有完全丟失蛋白酶活性相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)天冬氨酸蛋白酶及絲氨酸蛋白酶的相關(guān)基因進(jìn)行了一個(gè)宏觀的篩查,并對(duì)感興趣的基因進(jìn)行了表性和毒力的檢測(cè),試圖探討新生隱球菌特定蛋白酶與隱球菌致病能力的關(guān)系,但是其深入的分子細(xì)胞機(jī)制還需要在以后的研究中探討。
[Abstract]:Cryptococcus neoformans have been identified and isolated from Cryptococcus neoformans in the presence of Cryptococcus neoformans . In this experiment , we found that serine proteinase Ser5 involved in the induction and production of Cryptococcus neoformans .

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R379.5

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本文編號(hào)：1672216