本文選題：microRNA　切入點：巨噬細胞　出處：《吉林大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：micro RNA(mi RNA)是一種由21-25個堿基組成的非編碼單鏈核苷酸序列,通過特異性結(jié)合m RNA從而抑制其翻譯過程。mi RNA通過調(diào)控蛋白質(zhì)的合成從而參與調(diào)控幾乎所有的細胞代謝,甚至很多疾病的發(fā)生也與mi RNA有密切關(guān)系。目前mi RNA的臨床應(yīng)用也在逐漸被開發(fā),之前的研究表明,mi RNA檢測在疾病的診斷、治療和預(yù)后判斷上具有重要價值。如,mi R-21在惡性腫瘤中普遍升高,對腫瘤具有較高的診斷和判斷預(yù)后作用;mi R-155在B細胞淋巴瘤中明顯上升,mi R-155基因位點的突變可做為B細胞淋巴瘤的檢測指標;抑制活體內(nèi)mi R-126水平可明顯減輕哮喘癥狀,說明其在哮喘中的治療價值。雖然mi RNA的研究僅有幾十年的歷史,但它們?yōu)榧膊〉陌l(fā)生、診斷、治療等方面的作用已被大量開發(fā)。探討各種mi RNA在細胞中的作用和機制也成為一門重要的學科。巨噬細胞是機體免疫系統(tǒng)及其關(guān)鍵的組成部分,參與先天免疫和適應(yīng)性免疫,在對抗外來病原體、參與炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)方面發(fā)揮重要作用。研究認為,多種疾病的發(fā)生都與巨噬細胞有密切關(guān)系:由于巨噬細胞對機體免疫和防御反應(yīng)方面具有重要功能,缺乏會導(dǎo)致抵抗下降,使機體發(fā)生感染的機會大大增加;M2型巨噬細胞主要可激活Th2相關(guān)疾病如哮喘等,還對腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有促進作用;同時巨噬細胞在脂質(zhì)代謝方面發(fā)揮重要作用,巨噬細胞攝取修飾低密度脂蛋白過多會導(dǎo)致細胞內(nèi)脂質(zhì)堆積,向泡沫細胞轉(zhuǎn)化,發(fā)生動脈粥樣硬化。mi RNA作為近十幾年來興起的一種調(diào)控因子,在巨噬細胞代謝中發(fā)揮重要作用,mi RNA通過調(diào)控細胞因子的合成,從而調(diào)控巨噬細胞功能。然而,盡管之前有很多研究發(fā)現(xiàn)mi RNA在巨噬細胞的免疫反應(yīng)、脂質(zhì)代謝中具有重要作用,但很少有研究從起源上探討巨噬細胞生長分化相關(guān)的mi RNA。目前廣泛認為,組織巨噬細胞的更新主要來源于骨髓前體細胞的分化,巨噬細胞的分化異常會導(dǎo)致正常巨噬細胞數(shù)目下降或功能異常,從而誘導(dǎo)相關(guān)疾病的發(fā)生。探索mi RNA在骨髓細胞向巨噬細胞分化中的工作網(wǎng)絡(luò)及其調(diào)控機制引起了我們的興趣。因此,從眾多mi RNA中篩選出與巨噬細胞分化相關(guān)的mi RNA成為一個亟待解決的問題。我們的實驗?zāi)康氖峭ㄟ^microarray技術(shù)從上千種mi RNA中篩選出與巨噬細胞生長分化相關(guān)的mi RNA,并分析這些mi RNA與巨噬細胞成熟、免疫炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝等功能相關(guān)分子之間的關(guān)系,構(gòu)建mi RNA在這些巨噬細胞中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),從理論上篩選出參與巨噬細胞分化和功能的mi RNA及其相關(guān)分子通路,我們后續(xù)的實驗將會進一步驗證這些理論通路。該實驗是首次分析巨噬細胞分化過程中的mi RNA工作網(wǎng)絡(luò),并篩選出大量之前未被發(fā)現(xiàn)的巨噬細胞功能相關(guān)mi RNA,并提出mi RNA調(diào)控的分子通路假說,具有重要的研究價值。實驗方法:1.選取6-8周野生型BALB/c小鼠作為實驗對象,分離骨髓細胞后應(yīng)用巨噬細胞培養(yǎng)基培養(yǎng),誘導(dǎo)骨髓細胞分化,第3、5、7天收集細胞,Giemsa染色觀察細胞形態(tài),FACS測定巨噬細胞比例,細胞計數(shù)器測量細胞的數(shù)目;2.提取細胞m RNA,用microarray方法檢測骨髓細胞和第3、5、7天巨噬細胞的mi RNA表達水平;篩選表達變化最明顯的mi RNA,通過Target Scan分析這些mi RNA的靶基因,并用Me SH數(shù)據(jù)庫分析這些mi RNA調(diào)控的與巨噬細胞生長和功能有關(guān)的靶分子,通過Venn圖找出這兩種方法所得分子的重疊部分;3.將上述參與巨噬細胞生長功能的mi RNA靶標進行分析,通過Ingenuity Pathways Analysis(IPA)系統(tǒng)研究這些分子參與的巨噬細胞相關(guān)的信號通路,以及與巨噬細胞關(guān)鍵性分子密切相關(guān)的mi RNA。并總結(jié)具有多功能的mi RNA。實驗結(jié)果:1.FACS結(jié)果發(fā)現(xiàn),分化第3、5、7天收集的貼壁細胞中巨噬細胞百分比分別為92.2%、96%、99%。Gimsa染色示巨噬細胞從第3到7天巨噬細胞成熟過程中逐步發(fā)生形態(tài)學變化。細胞計數(shù)結(jié)果顯示骨髓細胞、第3、5、7天巨噬細胞濃度呈明顯上升趨勢。2.共有112種mi RNA在巨噬細胞分化過程中發(fā)生明顯變化,即上調(diào)或下調(diào)5倍以上。在第3天,56種mi RNA表達下降而58種mi RNA表達升高。第5天和第7天,66種mi RNA降低而48種mi RNA升高。3.Target Scan和Me SH軟件發(fā)現(xiàn),上述112種mi RNA共有8367種靶標分子,其中1267種靶標分子參與巨噬細胞的分化和功能,IPA分析發(fā)現(xiàn)這1267種分子與30種巨噬細胞經(jīng)典信號通路密切相關(guān)。如HGF、IL-6、NGF等通路參與調(diào)控細胞的生存和凋亡,糖皮質(zhì)激素受體、NF-κB,RANK等通路是巨噬細胞炎癥反應(yīng)通路。4.通過加入mi Randa和Ingenuity Pathways Analysis(IPA)分析系統(tǒng),進一步研究這112種mi RNA與巨噬細胞關(guān)鍵性功能分子的關(guān)系,我們發(fā)現(xiàn)18種mi RNA可能參與調(diào)節(jié)CSF1R,CD36,MSR1和SCARB1這四種巨噬細胞相關(guān)受體;7種mi RNA與轉(zhuǎn)錄因子RUNX1和PU.1的調(diào)節(jié)有關(guān);14種mi RNA與PPARα和PPARγ的m RNA有潛在的結(jié)合位點;17種mi RNA與TLR2、3、4、7、13這幾種受體的調(diào)節(jié)有關(guān)。5.通過分析上述生物信息軟件發(fā)現(xiàn)的與巨噬細胞關(guān)鍵性分子相關(guān)的mi RNA,我們發(fā)現(xiàn)mi R-155、mi R-18b、mi R-542-3p、mi R-152、mi R-129-5p、mi R-130a這6種mi RNA分別調(diào)控4種巨噬細胞分子;mi R-141和mi R-221這兩種mi RNA分別調(diào)控3種分子,mi R-24、mi R-150、mi R-22、mi R-34a、mi R-326、mi R-363、mi R-27b、mi R-101a、mi R-144、mi R-181c這10種mi RNA參與調(diào)控兩種分子。這些多功能mi RNA,尤其是調(diào)控4種巨噬細胞分子的6種mi RNA在以后研究巨噬細胞分化和功能中具有重要價值。結(jié)論:1.本研究用microarray的方法篩選出在骨髓巨噬細胞分化過程中明顯變化的mi RNA,并通過Target Scan和Me SH等軟件篩選出這些mi RNA的靶標中與巨噬細胞分化和功能有關(guān)的分子,以及這些靶標分子參與的信號通路。2.通過Target Scan、Mi Randa、IPA等軟件分析上述mi RNA以及巨噬細胞關(guān)鍵性分子如MSR1、CD36、SCRAB1、CSF1R、RUNX1、PU.1、PPARα、PPARγ、TLR2、TLR3、TLR4、TLR13和TLR7,篩選與這些分子相關(guān)的mi RNA,構(gòu)建相應(yīng)的mi RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。3.通過討論分析,確定了具有重要研究價值的mi RNA及其參與調(diào)控的分子和功能,我們將在后續(xù)的實驗中進一步驗證這些通路,發(fā)掘出更多的巨噬細胞相關(guān)mi RNA,為以后研究巨噬細胞相關(guān)疾病提供理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭振群;;關(guān)于巨噬細胞的幾個問題[J];山西醫(yī)藥雜志;1974年12期

2 ;豚鼠巨噬細胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細胞毒作用[J];國外醫(yī)學參考資料(衛(wèi)生學分冊);1976年04期

3 鄧俠進;;巨噬細胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學院學報;1979年02期

4 陸天才;;疾病對肺巨噬細胞的影響[J];煤礦醫(yī)學;1982年01期

5 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學院學報;1990年02期

6 謝志堅;巨噬細胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學綜述;2001年06期

7 饒艷;運動及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學;2002年05期

8 朱金元;;吸煙對肺巨噬細胞的影響[J];浙江醫(yī)學教育;2003年01期

9 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細胞系[J];醫(yī)學綜述;2004年03期

10 韋錦學;顧軍;;巨噬細胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學;2006年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結(jié)巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學術(shù)會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學術(shù)會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學術(shù)會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導(dǎo)的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學學術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉毎?THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學會第五次學術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學;2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機制[D];山東大學;2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調(diào)節(jié)的機制研究[D];山東大學;2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調(diào)控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學;2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學;2015年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細胞極化效應(yīng)對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復(fù)旦大學;2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞CCL5分泌的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用及機制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：1626965