本文選題：樹突狀細(xì)胞　切入點：FBXW7　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells,DCs)是專職的抗原提呈細(xì)胞(Antigen Presenting Cells,APC),其在免疫應(yīng)答的啟動過程中發(fā)揮非常重要的作用。DCs的效應(yīng)功能與其成熟的狀態(tài)密切相關(guān)。未成熟的DCs具有很強的抗原加工能力,表達(dá)低水平的MHC Ⅱ類分子以及共刺激分子,其提呈抗原和誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力較弱。未成熟的DCs受到某些刺激(例如LPS)后逐漸成熟,抗原提呈和免疫激活作用加強,形成抗原肽-MHC Ⅱ類分子復(fù)合物為T細(xì)胞活化提供第一信號,同時還會高表達(dá)CD80、CD86、CD40等共刺激分子,為T細(xì)胞活化提供第二信號。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在生命體中具有非常重要的作用,其中蛋白質(zhì)的泛素化是一種常見的修飾方式,并且泛素化修飾在天然免疫細(xì)胞識別、清除病原體及細(xì)胞信號傳導(dǎo)等過程中扮演重要的角色。SCF(SKP1-CUL1-F-box protein)E3泛素連接酶復(fù)合物由接頭蛋白SKP1,骨架蛋白Cullin-1,底物識別亞基或者F-box蛋白以及RING組件RBX1或RBX2組成。FBXW7是SCF E3泛素連接酶復(fù)合物中F-box蛋白中的一員,之前發(fā)現(xiàn)僅在K48位發(fā)生泛素化隨后降解靶蛋白,它在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、脂類代謝、細(xì)胞增殖分化以及維持干細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)等一系列生命活動中均扮發(fā)揮重要的調(diào)控功能,本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)FBXW7在炎癥中也發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,然而它是否調(diào)控樹突狀細(xì)胞的功能此前并未有人闡明。本課題的研究目的是觀察髓系特異性敲除FBXW7基因后小鼠樹突狀細(xì)胞的成熟及其功能的變化。我們使用Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)構(gòu)建了髓系細(xì)胞中特異性敲除FBXW7基因的小鼠(Lysm+FBXW7fl/fl mice,FBXW7 KO),取小鼠的骨髓細(xì)胞在細(xì)胞因子GM-CSF以及IL-4的作用下,體外將骨髓前體細(xì)胞誘導(dǎo)形成骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(bone marrow-deriven dendritic cells,BMDCs)進行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與WT小鼠相比,KO小鼠來源的BMDCs表面共刺激因子CD80、CD86以及MHCⅡ類分子的表達(dá)有明顯的降低。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),相比于WT小鼠,KO小鼠來源的BMDCs的IL-6、TNF-α、IL-12等炎癥因子的mRNA表達(dá)水平明顯下降而抗炎因子IL-10的mRNA表達(dá)水平顯著上升。隨后ELISA檢測BMDCs培養(yǎng)上清中的IL-6、IL-10、TNF-α以及IL-1β分泌水平,發(fā)現(xiàn)除了 IL-1β沒有明顯變化外,其余結(jié)果與mRNA表達(dá)水平結(jié)果相一致。為了進一步探究DCs的效應(yīng)功能,我們將BMDCs與OT-Ⅱ小鼠的脾細(xì)胞共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),WT小鼠來源的BMDCs能夠活化更多的初始T細(xì)胞,說明KO小鼠的BMDCs的免疫激活功能減弱。最后我們檢測了相關(guān)信號通路的變化,發(fā)現(xiàn)KO小鼠來源的BMDCs中NF-κB的活化降低而STAT3信號通路的活化顯著升高,表明這兩條信號通路可能參與FBXW7對DCs成熟和功能的調(diào)控。上述研究結(jié)果顯示了E3泛素連接酶FBXW7對小鼠BMDCs的成熟及其效應(yīng)功能有促進的作用,為進一步深入研究其機制建立了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Dendritic cells (DCs) are specialized antigen-presenting cells (APC). They play a very important role in the initiation of immune response. The effect function of DCs is closely related to their mature state. Immature DCs has strong antigen-processing ability. The ability of presenting antigen and inducing immune response of low level MHC class 鈪，

本文編號：1601349