本文關(guān)鍵詞： ADAMTS pEGFP-N載體 載體構(gòu)建 HeLa細(xì)胞　出處：《中國實驗血液學(xué)雜志》2013年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：本研究旨在構(gòu)建人血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的pEGFP-N1真核表達(dá)載體,為進(jìn)一步研究ADAMTS13在細(xì)胞內(nèi)合成及其分泌提供有力工具。通過PCR方法獲取目的基因片段,并在目的基因兩端加上限制性酶切位點。限制性內(nèi)切酶酶切后,連接至pEGPF-N1真核表達(dá)載體。連接后獲得質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定及DNA測序驗證,并轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞。通過熒光顯微鏡檢測綠色熒光蛋白表達(dá),Western blot方法鑒定所得蛋白。結(jié)果表明,酶切鑒定及DNA測序確認(rèn)目的基因與載體正確連接,在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光。Western blot顯示,轉(zhuǎn)染后HeLa細(xì)胞表達(dá)ADAMTS13蛋白。結(jié)論:成功構(gòu)建了ADAMTS13-pEGFP-N1真核表達(dá)載體,為進(jìn)一步研究ADAMTS13合成、分泌及其代謝的生理學(xué)機(jī)制提供了研究工具。
[Abstract]:The purpose of this study is to construct human von Willebrand factor cleaving protease (ADAMTS13) pEGFP-N1 eukaryotic expression vector, for further study in cellular ADAMTS13 synthesis and secretion. Provide a powerful tool to obtain the target gene fragment by PCR method, and the target gene ends with restriction endonuclease sites. After the connection to the eukaryotic expression vector pEGPF-N1. After the connection of plasmid by enzyme digestion and DNA sequencing, and then transfected into HeLa cells detected by fluorescence microscopy. The expression of green fluorescent protein, Western blot protein. The results show that the method of identification, enzyme digestion and DNA sequencing confirmed the target gene and the vector connected properly, to green fluorescent.Western blot. Under the fluorescence microscope showed that the expression of ADAMTS13 protein in HeLa cells after transfection. Conclusion: the successful construction of the eukaryotic expression vector ADAMTS13-pEGFP-N1 in It is a research tool to study the physiological mechanism of ADAMTS13 synthesis, secretion and metabolism.

【作者單位】： 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院、江蘇省血液研究所 衛(wèi)生部血栓與止血重點實驗室;
【基金】：江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目 江蘇省臨床醫(yī)學(xué)中心資助(編號ZX201102) 高等學(xué)校博士學(xué)科點專項科研基金(編號20103201110011)
【分類號】：R341

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