發(fā)布時(shí)間：2018-02-15 14:58

  本文關(guān)鍵詞： 庫(kù)蠓 種類(lèi)分布 COⅠ Cytb 分子系統(tǒng)學(xué)　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過(guò)對(duì)中國(guó)西南地區(qū)庫(kù)蠓種類(lèi)分布調(diào)查與整理,豐富西南地區(qū)庫(kù)蠓物種多樣性;PCR擴(kuò)增庫(kù)蠓的線(xiàn)粒體DNA COⅠ和Cytb序列,結(jié)合形態(tài)學(xué)分類(lèi)對(duì)其進(jìn)行種類(lèi)鑒別和系統(tǒng)發(fā)育分析,為實(shí)現(xiàn)吸血蠓快速、準(zhǔn)確鑒定奠定基礎(chǔ)。方法:1.采用網(wǎng)掃法、馬氏網(wǎng)采集法和燈誘法進(jìn)行庫(kù)蠓昆蟲(chóng)采集,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)制作永久玻片標(biāo)本,顯微鏡下根據(jù)形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行庫(kù)蠓種類(lèi)的鑒定,整理中國(guó)西南地區(qū)(四川、重慶、貴州、云南)庫(kù)蠓名錄。2.取待試庫(kù)蠓進(jìn)行DNA的提取,PCR擴(kuò)增線(xiàn)粒體DNA COⅠ和Cytb基因的目的片段。序列經(jīng)測(cè)定、校對(duì)、比對(duì)等分析后,選擇鄰接法(NJ)、最大似然法(ML)或最大簡(jiǎn)約法(MP)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果:1.整理中國(guó)西南地區(qū)庫(kù)蠓屬10亞屬129種,其中3種無(wú)法歸為任一亞屬,四川分布63種,重慶分布22種,貴州分布41種,云南分布89種,上述地區(qū)新紀(jì)錄17種。2.PCR擴(kuò)增得到庫(kù)蠓約650 bp的COⅠ序列、約500bp的Cytb序列,線(xiàn)粒體DNA COⅠ和Cytb序列的A+T含量(66.7/79.7)都遠(yuǎn)高于C+G含量(33.3/20.3);COⅠ序列通過(guò)BLAST與Genbank中已上傳庫(kù)蠓序列相似度很高,種類(lèi)匹配成功;COⅠ和Cytb序列同種類(lèi)不同地理種群、個(gè)體的序列比對(duì)相似度高,與形態(tài)鑒定結(jié)果一致;COⅠ和Cytb序列的遺傳距離經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,表明COⅠ序列的種內(nèi)遺傳距離分別與種間、亞屬間、屬間遺傳距離具差異;Cytb序列的種內(nèi)、種間、亞屬間、屬間遺傳距離均有差異;基于COⅠ基因?qū)?kù)蠓6個(gè)亞屬代表種及形態(tài)相似的近緣種構(gòu)建的NJ樹(shù)、ML樹(shù)和MP樹(shù),基于Cytb基因構(gòu)建12種庫(kù)蠓的NJ和MP分子系統(tǒng)樹(shù),都得到和形態(tài)學(xué)鑒定一致的結(jié)果,很好區(qū)分庫(kù)蠓不同種類(lèi)(包括近緣種),庫(kù)蠓不同亞屬各自構(gòu)成一個(gè)單系群,不同種類(lèi)各自形成一個(gè)單系,無(wú)種類(lèi)交叉,同種類(lèi)不同地理種群聚為一支,結(jié)合形態(tài)特征進(jìn)一步明確親緣關(guān)系。結(jié)論:1.豐富西南地區(qū)庫(kù)蠓物種多樣性,完善西南地區(qū)庫(kù)蠓地理區(qū)劃,為上述地區(qū)研究蠓傳疾病的發(fā)生、防治及野外防治蠓害提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。2.初步驗(yàn)證COⅠ和Cytb基因在吸血庫(kù)蠓(尤其是近似、近緣種)種類(lèi)鑒別和系統(tǒng)發(fā)育分析中的有效性,為后續(xù)開(kāi)發(fā)更多有效分子標(biāo)記奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to investigate and sort out the species distribution of Culicoides in Southwest China, to enrich species diversity of Culicoides in Southwest China by PCR amplification of mitochondrial DNA CO 鈪，

本文編號(hào)：1513537