發(fā)布時(shí)間：2018-02-01 18:54

  本文關(guān)鍵詞： 補(bǔ)腎生精方 腺嘌呤誘導(dǎo) 腎陽(yáng)虛型 少弱精大鼠模型　出處：《黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過(guò)觀察補(bǔ)腎生精方對(duì)少弱精大鼠模型睪丸、附睪組織質(zhì)量、精液質(zhì)量、血清性激素水平及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad1、Smad4基因在大鼠睪丸中表達(dá)的影響,探討補(bǔ)腎生精方對(duì)腺嘌呤誘導(dǎo)的腎陽(yáng)虛型少弱精大鼠模型作用機(jī)制,為臨床治療提供有效的科學(xué)依據(jù)。方法:將120只成熟的12周齡的SD雄性大鼠適用性飼養(yǎng)一周后,將其隨機(jī)分為模型組、空白組、高劑量組、中劑量組、低劑量組、西藥對(duì)照組共6組,每組各20只。將腺嘌呤配成濃度為500mg/mL的混懸液,除空白組大鼠給予生理鹽水灌胃外,其余各組均給予腺嘌呤進(jìn)行灌胃,每日灌胃1次,共灌胃28天,造成腎陽(yáng)虛型少弱精子癥大鼠模型,每組取出2只大鼠,用免疫組化法檢測(cè)睪丸及附睪組織造模是否成功。造模成功后,高、中、低劑量組分別給予不同劑量的補(bǔ)腎生精方灌胃治療,灌胃劑量分別為高劑量組為5.52g/100g體重、中劑量組為2.76g/100g體重、低劑量組為1.38g/100g體重,而模型組和空白組每日均給予1mL/100g體重的生理鹽水灌胃,西藥對(duì)照組每日給予10ml/kg體重的左卡尼汀注射液灌胃,每組均連續(xù)灌胃28天。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察大鼠一般狀態(tài)(如毛色、活動(dòng)、體態(tài)等),測(cè)日飲水量及進(jìn)食量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將大鼠全部處死,股動(dòng)脈取血、分離血清、摘取睪丸、性腺及附屬性腺稱重,提取附睪精液。采用計(jì)算機(jī)輔助精子質(zhì)量分析系統(tǒng)檢測(cè)大鼠的精子密度、精子活動(dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率;檢測(cè)大鼠的體重、睪丸及附睪的質(zhì)量;免疫組化法(SABC法)檢測(cè)大鼠睪丸中Smad 1、Smad 4的水平;采用放免法檢測(cè)各組大鼠的血清性腺激素睪酮(T)及黃體生成素(LH)水平、卵泡刺激素(FSH);采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)大鼠睪丸中Smad 1、Smad 4的定位和分布;Western Blot檢測(cè)大鼠睪丸中Smad 1、Smad 4的水平及采用酶免法檢測(cè)大鼠血清肝腎功能。結(jié)果:1.精子計(jì)數(shù)和精子活動(dòng)力檢測(cè)結(jié)果比較 空白組與模型組相比,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與模型組相比,高劑量組、中劑量組、低劑量組、西藥對(duì)照組各藥物治療組精子計(jì)數(shù)和精子活動(dòng)力顯著提高,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高劑量組精子計(jì)數(shù)和精子活動(dòng)力明顯高于中劑量組、低劑量組、西藥對(duì)照組,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而中劑量組與西藥對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)2.補(bǔ)腎生精方對(duì)腎陽(yáng)虛型大鼠性腺及附屬性腺組織的影響 與空白組相比,其他各組大鼠體重均明顯下降,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與模型組相比,高劑量組、中劑量組、西藥對(duì)照組明顯增高,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低劑量組與模型組相比無(wú)明顯差異(P0.05),中劑量組與西藥對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P0.05)。與空白組相比,各組大鼠睪丸濕重與附睪濕重均降低,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與模型組相比,高劑量組、中劑量組、西藥對(duì)照組大鼠睪丸濕重與附睪濕重均升高,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低劑量組與模型組相比無(wú)明顯差異(P0.05),中劑量組與西藥對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P0.05)。3.免疫組化發(fā)檢測(cè)各種Smad1、Smad4表達(dá)情況空白組及模型組中Smad1、Smad4在大鼠睪丸的各級(jí)生精細(xì)胞中均有表達(dá),Smad1免疫反應(yīng)陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),細(xì)胞核內(nèi)為陰性,間質(zhì)細(xì)胞及支持細(xì)胞均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá);Smad4免疫反應(yīng)陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞核內(nèi),細(xì)胞質(zhì)內(nèi)為陰性,支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及其他各級(jí)生精細(xì)胞均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。與模型組相比,其余各組Samd1的表達(dá)明顯降低,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高劑量組Samd1的表達(dá)明顯低于中劑量組、低劑量組、西藥對(duì)照組,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而中劑量組與西藥對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,其余各組Samd4的表達(dá)明顯升高,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高劑量組Samd4的表達(dá)明顯高于中劑量組、低劑量組、西藥對(duì)照組,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而中劑量組與西藥對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),4.各組動(dòng)物血清中性激素水平檢測(cè)比較分析 模型組中血清睪酮(T)水平降低,LH、FSH水平升高;而高、中、低劑量組血清睪酮(T)水平升高,LH、FSH水平降低,且高劑量組明顯優(yōu)于中、低劑量組,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,其余各組血清睪酮(T)水平,LH、FSH水平均有顯著性差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.各組大鼠睪丸中Smad1、Smad4mRNA半定量RT-PCR表達(dá)情況 在各組大鼠睪丸中,均可見(jiàn)到Smad1、Smad4的mRNA表達(dá),其中在模型組中Smad1的mRNA表達(dá)被抑制,Smad4的mRNA表達(dá)上調(diào),而自擬補(bǔ)腎生精方高劑量組中Smad 1的mRNA表達(dá)被上調(diào),Smad4的mRNA的表法被抑制。6.酶免疫法檢測(cè)腎臟功能情況 通過(guò)解剖觀察各組大鼠腎臟組織外觀、病理組織學(xué)檢查及超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察均無(wú)明顯改變,且血清檢查亦無(wú)明顯改變,說(shuō)明自擬補(bǔ)腎生精方治療腎陽(yáng)虛型少弱精不育大鼠安全可靠,無(wú)明顯不良反應(yīng)。結(jié)論:1.補(bǔ)腎生精方能夠有效增加精液密度,有效提高精子的活率及活力,并通過(guò)調(diào)節(jié)睪酮的分泌,增加睪丸及附屬性腺的質(zhì)量,使生精環(huán)境得到改善。2.補(bǔ)腎生精方能夠促進(jìn)大鼠生長(zhǎng)代謝以及大鼠睪丸及附睪組織的發(fā)育。3.補(bǔ)腎生精方治療后能促進(jìn)下丘腦-垂體分泌和調(diào)節(jié)促卵泡生成素(FSH)、促黃體生成素(LH)釋放,提高睪酮(T)濃度,降低雌二醇(E2)含量,調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-睪丸軸功能,改善性腺軸的功能紊亂。4.補(bǔ)腎生精方通過(guò)調(diào)控大鼠睪丸中TGF-β超家族的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smads基因的表達(dá),其可明顯增加Smad1在腎陽(yáng)虛型少弱精大鼠睪丸中的表達(dá),降低Smad4在腎陽(yáng)虛型少弱精大鼠睪丸中的表達(dá),且能夠上調(diào)Smad1的mRNA表達(dá),抑制Smad4的mRNA的表達(dá),說(shuō)明Smads在腎陽(yáng)虛型少弱精大鼠模型中起到了重要的作用,直接或間接促進(jìn)精子的生成。5.通過(guò)酶免疫法檢測(cè)各組大鼠血清中腎功能均無(wú)顯著變化,證明補(bǔ)腎生精方治療腎陽(yáng)虛型少弱精不育大鼠安全可靠,無(wú)明顯不良反應(yīng)。
[Abstract]:Objective: through the observation of Bushenshengjing on a little weak sperm rat model of testis, epididymis, sperm quality, serum sex hormone levels and transforming growth factor beta superfamily of intracellular signal transduction molecule Smad1, expression of Smad4 in testis of rats, to investigate the Bushenshengjing on adenine induced the kidney yang deficiency rat model little weak sperm mechanism, and provides scientific basis for clinical treatment. Methods: 120 mature 12 week old male SD rats for a week after feeding, they were randomly divided into model group, control group, high dose group, middle dose group. The low dose group, western medicine control group 6 group, 20 rats in each group. The concentration of adenine with suspension of 500mg/mL, except the blank group rats were given saline, other groups were given adenine by intragastric administration daily gavage 1 times, a total of gavage for 28 days, caused by kidney yang deficiency less weak 綺懼瓙鐥囧ぇ榧犳ā鍨，

本文編號(hào)：1482612