本文關(guān)鍵詞：人孤雌胚胎干細(xì)胞無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立　出處：《中國修復(fù)重建外科雜志》2013年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的建立一種安全、有效、經(jīng)濟(jì)且適于人孤雌胚胎干細(xì)胞(human parthenogenetic embryonic stemcells,hPESCs)體外培養(yǎng)的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。方法將常規(guī)體外培養(yǎng)的hPESCs分別以mTeSRTMl培養(yǎng)基(對(duì)照組)和人包皮成纖維細(xì)胞的條件培養(yǎng)基(human foreskin fibroblasts-conditional medium,hFFs-CM)(實(shí)驗(yàn)組)擴(kuò)增培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察兩組無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系下hPESCs的生長狀態(tài);采用ALP檢測和核型分析研究hPESCs生物學(xué)特性;采用RT-PCR檢測hPESCs全能性標(biāo)記物Oct-4的表達(dá)情況;通過體外和體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn)觀察hPESCs向3個(gè)胚層分化的潛能。結(jié)果兩組hPESCs形態(tài)規(guī)則、不易分化,在形態(tài)、擴(kuò)增速度等方面無明顯差異;已成功在體外培養(yǎng)15代,兩組均能保持正常女性的二倍體核型46,XX和全能性;RT-PCR檢測示兩組Oct-4 mRNA均呈陽性表達(dá);體外分化均可形成擬胚體;在裸鼠體內(nèi)均可形成含有3個(gè)胚層組織成分的畸胎瘤。結(jié)論 hFFs-CM無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系可長期支持hPESCs的生長并維持其未分化狀態(tài),成功建立了一種不僅能維持hPESCs的有效擴(kuò)增、減少動(dòng)物源性污染、降低培養(yǎng)成本,還可滿足臨床大規(guī)模應(yīng)用的hPESCs無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。
[Abstract]:Objective to establish a safe, effective, economical and suitable human parthenogenetic embryonic stemcells for human parthenogenetic embryonic stem cells. Methods hPESCs cultured in vitro was cultured in mTeSRTMl medium (control group). And human foreskin fibroblasts-conditional medium. The growth status of hPESCs was observed under inverted microscope under the culture system without feeding layer. ALP detection and karyotype analysis were used to study the biological characteristics of hPESCs. The expression of Oct-4, a potent marker of hPESCs, was detected by RT-PCR. The differentiation potential of hPESCs into three embryo layers was observed in vitro and in vivo. Results the morphology of hPESCs in the two groups was regular and it was not easy to differentiate. There was no significant difference in morphology and expansion speed between the two groups. After 15 generations of culture in vitro, both groups were able to maintain the diploid karyotype 46X and totipotency of normal women. RT-PCR showed that Oct-4 mRNA was positive in both groups. In vitro differentiation can form embryoid body. Teratoma containing three tissue components of the embryo layer could be formed in nude mice. Conclusion hFFs-CM culture system without feeder layer can support the growth of hPESCs for a long time and maintain its undifferentiated state. A culture system without feeding layer for hPESCs was successfully established, which can not only maintain the effective amplification of hPESCs, reduce animal pollution and reduce the cost of culture, but also meet the needs of large scale clinical application of hPESCs.
【作者單位】： 云南省第一人民醫(yī)院病理科;昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科;云南省第一人民醫(yī)院遺傳診斷中心;
【基金】：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(2013FZ179)~~
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 人孤雌胚胎干細(xì)胞(human parthenogenetic embryonicnet/kcms/detail/51.1372.R.20130423.1840.006.htmlstem cells,hPESCs)是通過人工方法(不經(jīng)過精子受精)激活卵母細(xì)胞獲得人孤雌囊胚,再分離其中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)所得的人胚胎干細(xì)胞(human embryonic stemcells,hESCs)。它與hESCs

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1440119