本文關(guān)鍵詞：弓形蟲exosomes的生物學(xué)特性及其調(diào)節(jié)宿主免疫功能的研究　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： Exosomes 弓形蟲 免疫調(diào)節(jié) 巨噬細(xì)胞 BALB/c小鼠

【摘要】：研究背景:弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生的原蟲,呈世界性分布,可感染包括人和牲畜在內(nèi)的所有溫血動物,引起人獸共患病的弓形蟲病,嚴(yán)重威脅人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展。目前,尚無理想的藥物用來防治弓形蟲病。因此,深入研究弓形蟲的致病機(jī)制,尋找新的防治弓形蟲病的藥物或疫苗顯得尤為重要。Exosomes是有核細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境的膜性小囊泡,直徑在30-100 nm之間。其中病原體分泌的exosomes具有一些特殊的生物學(xué)功能,如介導(dǎo)病原體與宿主的信息交流、調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答等。然而,弓形蟲是否產(chǎn)生并分泌exosomes尚不清晰。研究目的:從弓形蟲RH株和ME 49株的速殖子培養(yǎng)上清液中分別提取并鑒定exosomes,評價弓形蟲exosomes對巨噬細(xì)胞和BALB/c小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用,為尋找防治弓形蟲病的藥物或疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法:利用透射電鏡和Western blotting分析鑒定從弓形蟲速殖子培養(yǎng)液中獲取的exosomes形態(tài)結(jié)構(gòu)和表面標(biāo)志。用PKH 67綠色熒光染料對弓形蟲分泌的exosomes進(jìn)行染色后與RAW264.7巨噬細(xì)胞共孵育,在熒光顯微鏡下觀察exosomes與巨噬細(xì)胞融合情況,采用ELISA法檢測弓形蟲exosomes影響小鼠巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平。將弓形蟲exosomes經(jīng)肌肉注射免疫接種BALB/c小鼠,檢測小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答來評價其作為抗弓形蟲候選疫苗的免疫保護(hù)效果。結(jié)果:透射電鏡和WB檢測結(jié)果顯示,弓形蟲exosomes形態(tài)結(jié)構(gòu)呈圓形或橢圓形、直徑大小在10-150 nm之間、含有蛋白分子P30和Hsp 70。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,弓形蟲exosomes能與巨噬細(xì)胞融合,且能調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的水平。弓形蟲exosomes免疫接種BALB/c小鼠后能產(chǎn)生更高水平的IFN-γ、IL-12、IgG和IgG2a,小鼠的生存時間也明顯延長。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,弓形蟲exosomes誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生一定的體液免疫與細(xì)胞免疫,可為抵抗弓形蟲速殖子攻擊提供部分免疫保護(hù)力。結(jié)論:弓形蟲exosomes與巨噬細(xì)胞融合并調(diào)節(jié)其分泌細(xì)胞因子水平,表明巨噬細(xì)胞是弓形蟲exosomes的靶細(xì)胞之一。弓形蟲分泌的exosomes作為疫苗可刺激小鼠產(chǎn)生一定的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,表明弓形蟲exosomes也可成為抵抗細(xì)胞內(nèi)病原體的候選疫苗,為研制弓形蟲新型疫苗奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Background: Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasitic protozoa, with worldwide distribution, can infect all warm blooded animal including human and livestock, causing zoonoses toxoplasmosis, a serious threat to human health and animal husbandry development. At present, there is no ideal drug for prevention of toxoplasmosis. Therefore, pathogenic mechanism study of Toxoplasma gondii, looking for new drugs or vaccines for prevention of toxoplasmosis is particularly important to.Exosomes is a membranous capsule extracellular environment secretted mononuclear cells, 30-100 in diameter between nm. The pathogens secrete exosomes has some special biological functions, such as information exchange mediated by pathogen and host, regulation the host immune response. However, whether the production and secretion of exosomes of Toxoplasma gondii is unclear. Objective: are supernatant from Toxoplasma gondii RH strain and ME strain 49 tachyzoites culture The evaluation and identification of exosomes, regulation of immunity of Toxoplasma gondii exosomes on macrophage and BALB/c in mice, and provide experimental basis for prevention drugs for toxoplasmosis or vaccine. Methods: using transmission electron microscope and Western analysis and identification of blotting from Toxoplasma gondii tachyzoites in the culture medium to obtain exosomes morphology and surface markers on the secretion of Toxoplasma gondii. PKH 67 green fluorescent dye exosomes were stained with RAW264.7 macrophages incubated with exosomes macrophage fusion observed under fluorescent microscope. ELISA method was used to detect Toxoplasma gondii exosomes mice macrophage cytokine secretion. The exosomes of Toxoplasma gondii by intramuscular immunization of BALB/c mice in mice generated humoral immunity and to evaluate the cellular immune response as immune protective effect against Toxoplasma gondii vaccine candidates. Results: through Transmission electron microscopy and WB assay showed that the morphology of exosomes from Toxoplasma gondii were round or oval in diameter 10-150 between nm, P30 and Hsp 70. protein molecules in vitro experiments showed that Toxoplasma exosomes and macrophage fusion, and regulation of macrophage cytokine secretion level. IFN- gamma, exosomes of Toxoplasma gondii BALB/c immunization after the mice had higher levels of IL-12, IgG and IgG2a, the survival time of mice was significantly prolonged. In vivo results showed that humoral immune and immune cells of Toxoplasma gondii in mice induced by exosomes, can provide some protective immunity against Toxoplasma attack. Conclusion: Toxoplasma gondii exosomes and macrophages fusion and adjusting the level of secretory cytokines, suggesting that macrophages are target cells of Toxoplasma gondii exosomes. Toxoplasma gondii exosomes as vaccine can stimulate the secretion of mice Certain humoral and cellular immune responses are generated, indicating that Toxoplasma gondii exosomes can also be a candidate vaccine against intracellular pathogens, which lays a theoretical foundation for developing new vaccine of Toxoplasma gondii.

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R382.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳照金;先天性弓形蟲病10例[J];中國鄉(xiāng)村醫(yī)生;2000年04期

2 王建成;什么是弓形蟲和弓形蟲病?[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2003年05期

3 袁吉云,張奎,楊汝杰,張蔚;蘇州地區(qū)弓形蟲病的初步調(diào)查(摘要)[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1982年01期

4 張秀平;;弓形蟲病化學(xué)治療的研究[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1984年03期

5 王長烈;在淋巴結(jié)炎患者中查出弓形蟲病[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1987年03期

6 孫德建;;布隆迪弓形蟲病血清流行病學(xué)調(diào)查[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1989年03期

7 邵其峰;趙玉強(qiáng);;全國弓形蟲病防治科研會議簡訊[J];中國寄生蟲病防治雜志;1990年04期

8 甘紹伯,李爽;弓形蟲病100例分析[J];中國人獸共患病雜志;1991年05期

9 崔君兆,馬重麟,陸宙光,于恩庶;診治11例弓形蟲病的經(jīng)驗(yàn)和診斷標(biāo)準(zhǔn)的探討[J];中國人獸共患病雜志;1991年05期

10 薛純良;弓形蟲病的現(xiàn)代治療[J];寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1991年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 朱引潔;吳文學(xué);賀國強(qiáng);;弓形蟲病的診斷現(xiàn)狀[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

2 李輝;張健;;一例犬弓形蟲病的診斷與治療[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會小動物醫(yī)學(xué)分會第四次學(xué)術(shù)研討會、中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)外科學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形蟲病的流行的新趨勢[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會食品衛(wèi)生學(xué)分會第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

4 崔平;秦建華;方素芳;;河北省動物弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

5 藺智兵;張厚雙;曹杰;周勇志;李國清;周金林;;弓形蟲real-time PCR檢測方法的建立和初步應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

6 楊娜;穆名楊;李紅魁;何建斌;;中國東北地區(qū)雞源弓形蟲的流行病學(xué)調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

7 劉晶;蔡進(jìn)忠;于晉海;夏兆飛;林德貴;劉群;;幾種動物弓形蟲病血清流行病學(xué)的初步調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

8 王權(quán);蔣蔚;荊振宇;陳永軍;楊康;宋寧寧;崔常勇;;五種中藥體外抗弓形蟲抑制效果的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

9 鞏薇;衛(wèi)禮;王吉;賀爭鳴;邢瑞昌;;實(shí)驗(yàn)小鼠弓形蟲檢測方法的建立及應(yīng)用[A];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

10 陳西岐;劉秀蘭;張克功;于德順;;貓弓形蟲病的診治[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 林曉麗;養(yǎng)貓者易感染弓形蟲應(yīng)謹(jǐn)防患精神分裂癥[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

2 小郭;弓形蟲病危害不輕[N];中國商報;2000年

3 戴培紅;北京友誼醫(yī)院探索治療弓形蟲病的新途徑[N];中國醫(yī)藥報;2000年

4 本報記者 蔡玉冰 通訊員 黃賢君;弓形蟲沒你想的可怕[N];廣東科技報;2012年

5 李水源;當(dāng)前豬場弓形蟲病的防控[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2013年

6 本報記者 白軼南;弓形蟲病 危及胎兒健康[N];保健時報;2005年

7 臨城縣畜牧局 李路民;豬得弓形蟲病 吃了貓的虧[N];河北科技報;2002年

8 北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所研究員 甘紹伯 副主任醫(yī)師 馮曼玲;弓形蟲——寵物的“寵物”[N];健康報;2000年

9 連孝華;孕婦玩貓狗易危害胎兒[N];衛(wèi)生與生活報;2007年

10 王志海 邵芹;犬弓形蟲病[N];中國畜牧報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 呂剛;弓形蟲表面抗原蛋白5的結(jié)構(gòu)分析及免疫學(xué)研究[D];山東大學(xué);2015年

2 龔國華;上海城區(qū)犬、貓弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查及藥物治療的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 尹青;弓形蟲Δbag1Δku80株的構(gòu)建及其作為貓弓形蟲病疫苗候選株的免疫原性、安全性和效力的評價[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 徐鵬;弓形蟲新毒力基因TgMAPK1表達(dá)特性及其初步功能研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 張步彩;泰州地區(qū)豬弓形蟲血清流行病學(xué)調(diào)查及中藥治療急性感染弓形蟲小鼠效果的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

6 陳金鈴;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞失能參與弓形蟲分泌排泄抗原致小鼠早孕流產(chǎn)的機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

7 楊鳴發(fā);弓形蟲RH株脯氨酰氨氨基肽酶特征與功能性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 張括;人—兔嵌合型抗弓形蟲IgM抗體基因庫的構(gòu)建和抗弓形蟲IgG抗體參考物質(zhì)的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

9 張偉超;TALEN和CRISPR技術(shù)在弓形蟲致病機(jī)制研究中的應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 李木子;弓形蟲半胱氨酸蛋白酶Metacaspases功能及作用機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊曉宇;重組弓形蟲TRXL蛋白和EN02蛋白免疫保護(hù)力的評價[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 蔣宗儒;弓形蟲ROP18激酶抑制宿主NF-κB信號通路的分子機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 趙玲瀟;基于泛素-弓形蟲多價抗原的重組疫苗對小鼠的免疫保護(hù)性研究[D];山東大學(xué);2015年

4 王帥;弓形蟲超氧化物歧化酶（SOD）基因分析和克隆表達(dá)[D];山東大學(xué);2015年

5 冷麗;云南大理HIV陽性者感染弓形蟲SAG1、c22-8基因位點(diǎn)的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

6 李筱鑫;弓形蟲酪蛋白激酶CK1β基因缺失株構(gòu)建[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 蔡玉峰;貓弓形蟲抗體ELISA檢測方法的建立與評價[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 閆曉月;弓形蟲棒狀體蛋白ROP7的生物信息學(xué)分析、原核表達(dá)及組織學(xué)定位[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 李芬香;弓形蟲TgPRMT5基因的克隆鑒定，細(xì)胞定位及功能初步分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 趙東岳;弓形蟲B1等基因Real-time PCR與截短SAG2基因克隆、表達(dá)及ELISA建立[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

，

本文編號：1439774