發(fā)布時(shí)間：2018-01-12 04:00

  本文關(guān)鍵詞：屎腸球菌TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的研究　出處：《中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)》2013年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 屎腸球菌 TaqMan熒光定量PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線

【摘要】：目的建立屎腸球菌的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法。方法根據(jù)屎腸球菌的ddl基因設(shè)計(jì)TaqMan熒光定量PCR特異的引物及探針,在多種常見致病菌及條件致病菌中檢測(cè)其特異性;將目的基因克隆到pMD18-T載體中建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,檢測(cè)方法的靈敏度和穩(wěn)定性;使用腹水模擬標(biāo)本驗(yàn)證方法的應(yīng)用性。結(jié)果在特異性評(píng)價(jià)中,除了陽性對(duì)照外其余菌株均未見特異性擴(kuò)增曲線。建立屎腸球菌TaqMan熒光定量PCR方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定本方法對(duì)質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)下限為20copy/管。通過對(duì)1.0×107、1.0×105和1.0×1033個(gè)濃度質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)檢測(cè),確定屎腸球菌TaqMan熒光定量PCR方法的組內(nèi)變異系數(shù)為1.90%～3.91%;組間變異系數(shù)為1.52%～1.69%。應(yīng)用屎腸球菌TaqMan熒光定量PCR方法對(duì)含菌量為1.6×100～1.6×108cfu/mL濃度梯度的腹水模擬標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),其檢測(cè)靈敏度為1.6×102cfu/mL。結(jié)論本研究建立了屎腸球菌TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法。
[Abstract]:TaqMan fluorescent quantitative PCR method for detection of Enterococcus faecium. Objective to establish a method according to the primer and probe of DDL gene of Enterococcus faecium TaqMan fluorescence quantitative PCR specific design, the specific detection of common pathogenic bacteria and pathogenic bacteria in a variety of conditions; the target gene was cloned to the pMD18-T vector to establish the standard curve, detection sensitivity and stability; the application of using the simulation verification method. Ascites specimens results in specific evaluation, in addition to the positive control strains had no specific amplification curve. A standard curve of Enterococcus faecium TaqMan fluorescence quantitative PCR method, the method of determining the standard plasmid detection limit of 20copy/ tube. The repeated detection of 1 x 107,1.0 x 105 and 1 * 1033 concentration of standard plasmid, identified Enterococcus faecium TaqMan fluorescence quantitative PCR method within group variation coefficient is 1.90% ~ 3.91%; group variation. The number is 1.52% ~ 1.69%. application of Enterococcus faecium TaqMan fluorescence quantitative PCR method of bacteria quantity is 1.6 * 100 ~ 1.6 * 108cfu/mL concentration gradient of ascites simulation specimens were detected, the detection sensitivity is 1.6 * 102cfu/mL. conclusion: This study established the Enterococcus faecium TaqMan fluorescence quantitative PCR detection method.

【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)(No.2011ZX10004-001,No.2012ZX10004-501) 衛(wèi)生科研行業(yè)專項(xiàng)(No.201302006)聯(lián)合資助~~
【分類號(hào)】：R378.1
【正文快照】： 屎腸球菌是人類胃腸道常見的細(xì)菌之一,廣泛存在于土壤、水、動(dòng)物(鳥類、昆蟲)中。雖然很少引起正常人的感染性疾病,但是屎腸球菌是院內(nèi)感染的常見病原菌。最近十年,在美國(guó)、歐洲和南美多個(gè)國(guó)家中由屎腸球菌引起感染的比例逐年升高[1-2]。由于屎腸球菌對(duì)多種一線抗生素包括青霉

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王艷;趙愛蘭;葉長(zhǎng)蕓;;熒光定量PCR技術(shù)用于模擬臨床標(biāo)本單增李斯特菌檢測(cè)的研究[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2009年06期

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【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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3 楊明珠;;監(jiān)護(hù)病房?jī)?nèi)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染的護(hù)理[J];上海護(hù)理;2009年04期

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 何z殉，

本文編號(hào)：1412557