本文關(guān)鍵詞：甲型H1N1流感病毒核蛋白NP的真核表達(dá)　出處：《現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)》2013年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的構(gòu)建甲型SWH1N1流感病毒核蛋白(NP)的桿狀病毒真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞表達(dá)并純化其編碼蛋白。方法從江蘇SWH1N1流感病毒毒株(A/Jiangsu/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增NP基因,將其克隆至pMD18-TSimple Vector中構(gòu)建pMD18-T/NP質(zhì)粒,雙酶切pMD18-T/NP與p-fast后,連接構(gòu)建真核表達(dá)載體p-fast-NP,轉(zhuǎn)化DH10Bac細(xì)胞,轉(zhuǎn)座構(gòu)建桿狀病毒NP-Bacmid,經(jīng)酶切及測序鑒定后將NP-Bacmid轉(zhuǎn)染到sf9細(xì)胞中,通過免疫印跡法鑒定NP蛋白的表達(dá),采用親和層析法純化NP蛋白。結(jié)果經(jīng)雙酶切、測序鑒定證實NP基因的真核表達(dá)載體構(gòu)建成功;免疫印跡法證實NP基因的表達(dá);純化獲得了高純度的NP蛋白。結(jié)論成功克隆了NP基因,并構(gòu)建了其桿狀病毒真核表達(dá)載體,該表達(dá)載體的構(gòu)建為后期的流感病毒快速檢測以及基因工程疫苗制備奠定了良好的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct a baculovirus eukaryotic expression vector of influenza A SWH1N1 nucleoprotein (NPN). Methods RNA was extracted from Jiangsu SWH1N1 influenza virus strain A / Jiang / 1 / 2009 H _ 1 / H _ 1. NP gene was amplified by RT-PCR and cloned into pMD18-TSimple Vector to construct pMD18-T/NP plasmid. After double enzyme digestion of pMD18-T/NP and p-fast, the eukaryotic expression vector p-fast-NPN was constructed and transformed into DH10Bac cells. The baculovirus NP-Bacmida was constructed by transposing. After restriction endonuclease digestion and sequencing, NP-Bacmid was transfected into sf9 cells and the expression of NP protein was identified by Western blotting. NP protein was purified by affinity chromatography. Results the eukaryotic expression vector of NP gene was successfully constructed by double enzyme digestion and sequencing. The expression of NP gene was confirmed by Western blot. Conclusion the NP gene was cloned successfully and its eukaryotic expression vector was constructed. The construction of the expression vector laid a good foundation for rapid detection of influenza virus and preparation of genetic engineering vaccine.
【作者單位】： 江蘇省疾病預(yù)防控制中心病原微生物研究所 衛(wèi)生部腸道病原微生物重點實驗室;
【基金】：江蘇省自然科學(xué)基金資助項目(BK2009433;BK2009431) 江蘇省衛(wèi)生廳資助項目(Z200919;H200857)
【分類號】：R373.1
【正文快照】： 流行性感冒是一種最常見的病毒性急性呼吸道傳染病,傳染性強(qiáng),并易導(dǎo)致肺炎等嚴(yán)重并發(fā)癥,甚至死亡[1]。流感病毒是致流行性感冒的主要病原體。流感病毒屬正黏病毒科,是一種帶包膜并且分節(jié)段的單負(fù)鏈RNA病毒[2]。根據(jù)病毒核衣殼蛋白(NP)和基質(zhì)蛋白(Matrix,M)抗原性的差異,流感

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本文編號：1374146