本文關(guān)鍵詞：羧甲基殼聚糖對體外培養(yǎng)雪旺細胞增殖周期及其分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子的影響　出處：《中國修復(fù)重建外科雜志》2013年08期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的探討羧甲基殼聚糖(carboxymethylated chitosan,CMCS)對雪旺細胞(Schwann cells,SCs)增殖周期及分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子的影響及其作用機制。方法取3～5日齡SPF級SD大鼠20只,雌雄不限,體重25～30 g,取雙側(cè)坐骨神經(jīng)體外培養(yǎng)SCs,經(jīng)S-100免疫熒光標記鑒定。取處于對數(shù)生長期的第2代SCs,細胞計數(shù)檢測試劑盒8檢測不同濃度CMCS及作用不同時間對SCs增殖的影響。將SCs分為4組,加入CMCS調(diào)整終濃度為50(B組)、100(C組)、200μg/mL(D組),對照組(A組)加入等量PBS,流式細胞技術(shù)檢測處于S期細胞的百分比(S%)和增殖指數(shù)(proliferation index,PI)分析細胞周期;實時定量PCR與Western blot檢測SCs合成NGF和睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)的含量。結(jié)果 S-100免疫熒光標記鑒定示細胞陽性率達90%以上。CMCS在10～1 000μg/mL濃度范圍內(nèi)對SCs增殖均有促進作用,200、500μg/mL組促增殖效應(yīng)最明顯(P0.01),200μg/mL與500μg/mL組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。采用200μg/mL CMCS培養(yǎng)SCs不同時間,發(fā)現(xiàn)作用24 h時其促增殖效果最明顯,與對照組(200μg/mL CMCS作用0 h)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。B、C、D組S%及PI均顯著高于A組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C、D組顯著高于B組(P0.05),C、D組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實時定量PCR和Western blot檢測均顯示,B、C、D組NGF與CNTF mRNA和蛋白表達均顯著高于A組(P0.05);其中D組作用最明顯。結(jié)論 CMCS可以促進SCs增殖及細胞周期進程以及分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of carboxymethylated chitosanine (CMCs) on Schwann cells in Schwann cells. Methods Twenty SD rats of SPF grade at the age of 3 days and 5 days of age were selected, male and female, 2530g and 2530g respectively. The sciatic nerves of both sides were cultured in vitro and identified by S-100 immunofluorescence labeling. The second generation of SCs in logarithmic growth phase was obtained. Cell count assay kit 8 was used to detect the effects of different concentrations of CMCS and time on the proliferation of SCs. SCs was divided into 4 groups, adding CMCS to adjust the final concentration to 50B). The same amount of PBS was added to group C (n = 200 渭 g / mL) and group A (control group). Cell cycle was analyzed by flow cytometry (FCM) and proliferation index (Pi). Real-time quantitative PCR and Western blot were used to detect the synthesis of NGF and ciliary neurotrophic factor by SCs. CNTF). Results S-100 immunofluorescence labeling showed that the positive rate of cells was more than 90%. CMCs could promote the proliferation of SCs in the concentration range of 101000 渭 g / mL. The proliferation effect of 200,500 渭 g / mL group was the most obvious (P0.01). There was no significant difference between the 200 渭 g / mL and 500 渭 g / mL groups (P 0.05). SCs was cultured with 200 渭 g / mL CMCS for different time. It was found that the proliferation effect was the most obvious at 24 h after treatment, and there was a significant difference compared with the control group (200 渭 g / mL CMCS for 0 h). The S% and Pi in group D were significantly higher than those in group A (P 0.05). There was no significant difference between group D and group B (P 0.05). Real time quantitative PCR and Western blot detection showed BMC. The expressions of NGF and CNTF mRNA and protein in group D were significantly higher than those in group A (P 0.05). Conclusion CMCS can promote the proliferation and cell cycle progression of SCs and secrete neurotrophic factors.
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院骨科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(30600627、30801166)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 雪旺細胞(Schwann cells,SCs)是周圍神經(jīng)系統(tǒng)的主要膠質(zhì)細胞,在脊髓及周圍神經(jīng)損傷再生修復(fù)中發(fā)揮重要作用[1-2]。神經(jīng)組織工程是目前神經(jīng)再生領(lǐng)域研究的熱點和難點,SCs作為該領(lǐng)域的種子細胞受到廣大學(xué)者重視。SCs體外增殖緩慢,因此促進體外培養(yǎng)SCs增殖成為研究熱點[3]。羧甲

【參考文獻】

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