本文關鍵詞：淫羊藿苷對魚藤酮誘導的大鼠腦線粒體損傷所致帕金森病模型的保護作用　出處：《遵義醫(yī)學院》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:觀察淫羊藿苷(icariin,ICA)對魚藤酮(rotenone,ROT)誘導的大鼠線粒體功能損傷的保護作用,并探討其可能存在的保護機制。方法:100只體重在220-250 g的SD雄性大鼠隨機分為空白組、ICA空白給藥組、ROT(1 mg/kg/day)組、ICA低劑量組、ICA高劑量組。ROT采用背部皮下注射給藥,ICA采用灌胃給藥。具體為,ICA空白給藥組采用灌胃30 mg/kg/day的ICA以及背部皮下注射0.2 m L/100 g溶媒(DMSO:生理鹽水=1:1),連續(xù)5周;ROT組采用背部皮下注射ROT(1 mg/kg/day),同時灌胃0.5 m L/100 g的dd H2O,連續(xù)給藥5周;ICA低劑量組和ICA高劑量組背部皮下注射ROT(1 mg/kg/day),同時分別灌胃ICA15和30 mg/kg/day,連續(xù)5周;空白組采用灌胃0.5 m L/100 g的dd H2O和背部皮下注射溶媒(DMSO:生理鹽水=1:1)。動物給藥結束后,檢測行為學以及各類生化和分子生物學指標。(1)轉棒實驗檢測行為學指標。(2)免疫組化酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)染色法檢測ICA對ROT誘導的多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元損傷的保護作用。(3)采用Oxygraph-2k線粒體呼吸功能儀,檢測各組動物線粒體呼吸功能。(4)實時定量PCR(Real time-PCR,RT-PCR)法檢測皮質PGC-1α、TFAM基因水平。(5)Western blot法檢測大鼠皮質、紋狀體中α-突觸核蛋白(α-synuclein)的表達。(6)Western blot法檢測大鼠皮質、紋狀體中自噬相關蛋白:beclin-1、LC3-II、SQSTTM1/P62及自噬調控相關蛋白:m TOR、p-m TOR、P70 S6 Kinase、p-P70 S6 Kinase的表達。(7)采用PC12細胞株進一步研究ROT的細胞毒性及ICA的保護作用。細胞分為空白組、ROT(1μM)、ROT(1μM)+ICA(2μM)低劑量組、ROT(1μM)+ICA(4μM)高劑量組,共4組。(i)乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)試劑盒檢測細胞毒性;(ii)Oxygraph-2k線粒體呼吸功能儀檢測各組細胞線粒體呼吸功能的差異;(iii)Western blot法檢測自噬相關蛋白:beclin-1、LC3-II、SQSTTM1/P62及自噬調控相關蛋白:m TOR、p-m TOR、P70 S6 Kinase、p-P70 S6 Kinase的表達。結果:動物實驗結果(1)轉棒實驗結果顯示:與空白組比較,ROT模型組轉棒時間明顯減少,給藥ICA后顯著提高轉棒時間(P0.05)。(2)免疫組化染色表明,ROT導致DA能神經(jīng)元數(shù)量減少,給藥ICA低、高劑量后DA能神經(jīng)元數(shù)量明顯增加(P0.05)。(3)Oxygraph-2k線粒體呼吸功能結果顯示:與空白組相比,ROT組線粒體呼吸功能明顯下降(P0.05);與ROT模型組比較,ICA高劑量組線粒體呼吸功能顯著提升(P0.05)。(4)RT-PCR結果顯示:與空白組相比,ROT組PGC-1α和TFAM基因表達均顯著下降。其中,給藥ICA低、高劑量后,PGC-1α基因表達較ROT模型組均明顯上調;給藥ICA高劑量后,TFAM基因較ROT組明顯升高。(5)Western blot結果顯示:經(jīng)ROT作用,大鼠皮質和紋狀體中α-synuclein蛋白表達明顯升高;ICA低、高劑量組與ROT模型比較,α-synuclein蛋白表達明顯下調。進一步,ROT導致自噬及相關調控蛋白表達改變。結果顯示,ROT導致皮質和紋狀體中beclin-1和LC3-II蛋白表達水平下降,同時P62,p-m TOR,p-P70表達升高,表明自噬通路被抑制,而ICA給藥明顯激活LC3-II和beclin-1蛋白表達,同時降低P62,p-m TOR,p-P70蛋白水平,改善ROT誘導的自噬通路的抑制。細胞實驗中,與空白組比較,ROT導致細胞內LDH釋放顯著升高,線粒體呼吸功能被抑制,自噬被抑制;與ROT組比較,ICA能顯著降低LDH的釋放,保護線粒體呼吸功能及改善自噬過程的抑制。結論:ICA保護線粒體功能,降低ROT誘導的神經(jīng)毒性,其保護機制可能與ICA激活細胞自噬,提高α-synuclein蛋白降解以及促進受損線粒體的清除有關。
[Abstract]:鐩殑:瑙傚療娣緤钘胯嫹(icariin,ICA)瀵歸奔钘ら叜(rotenone,ROT)璇卞鐨勫ぇ榧犵嚎綺掍綋鍔熻兘鎹熶激鐨勪繚鎶や綔鐢，

本文編號：1362060