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  本文關(guān)鍵詞：不同血清濃度對(duì)bFGF聯(lián)合EGF誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響　出處：《神經(jīng)解剖學(xué)雜志》2013年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:探討不同血清濃度條件下堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)聯(lián)合表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向神經(jīng)細(xì)胞分化方向的影響。方法:全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)BMSCs,流式細(xì)胞法檢測(cè)BMSCs表面骨髓基質(zhì)標(biāo)志CD90和造血細(xì)胞標(biāo)志CD45,MTT法繪制第3(P3)代BMSCs生長曲線。取P4代細(xì)胞分為3組給予不同誘導(dǎo)條件,分別給予含20 ng/ml的bFGF和20 ng/ml EGF的無胎牛血清(A組)、10 ml/L胎牛血清(B組)及100 ml/L胎牛血清(C組)的DMEM/F-12培養(yǎng)液進(jìn)行誘導(dǎo),倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,誘導(dǎo)6 d時(shí)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)及膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá),臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)各組細(xì)胞的活力。結(jié)果:BM-SCs經(jīng)3-4次傳代培養(yǎng)后形態(tài)大致呈單一的長梭形或扁平形,流式細(xì)胞鑒定顯示CD90陽性,CD45陰性;細(xì)胞生長曲線近似呈"S"形;誘導(dǎo)后可見細(xì)胞胞體收縮,呈雙極、多極并伸出突起;誘導(dǎo)6 d時(shí)3組活細(xì)胞率分別為:86.57%、95.29%、97.32%;免疫組化各組均見NSE、GFAP表達(dá),3組NSE陽性率高于GFAP,A組NSE陽性率高于B、C組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),C組NSE陽性率高于B組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),A組GFAP陽性率低于B、C組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),C組GFAP陽性率高于B組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:bFGF聯(lián)合EGF可誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化,在無血清條件下趨向于向神經(jīng)元分化,在高濃度血清條件下趨向膠質(zhì)細(xì)胞分化。
[Abstract]:Objective: to study basic fibroblast growth factor of basic fibroblast growth factor (BFGF) under different serum concentrations. BFGF combined with epidermal growth factor. EGF-induced bone mesenchymal stem cells. Methods: whole bone marrow adherent method was used to isolate and culture BMSCs in vitro. Bone marrow stromal marker (CD90) and hematopoietic marker (CD45) on the surface of BMSCs were detected by flow cytometry. MTT method was used to draw the BMSCs growth curve of the 3rd generation. The P4 passage cells were divided into 3 groups under different induction conditions. Group A was given fetal bovine serum containing 20 ng/ml bFGF and 20 ng/ml EGF, respectively. 10 ml/L fetal bovine serum group B) and 100 ml/L fetal bovine serum group C) were induced by DMEM/F-12 culture medium, and the morphological changes of cells were observed by inverted microscope. The expression of neuron-specific enolase (NSE) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) were detected by immunohistochemistry at 6 d after induction. Trypan blue staining was used to detect the viability of the cells in each group. Results the morphology of BM-SCs was approximately a single spindle or flattened shape after 3-4 passages. Flow cytometry showed that CD90 was positive. CD45 negative; The cell growth curve was approximately "S" shape. After induction, the cell bodies contracted, showing bipolar, multipolar and protruding processes. On the 6th day after induction, the living cell rates of the three groups were respectively: 86.57 and 95.299.32; The positive rate of NSE in three groups was higher than that in group A (P 0.01). The positive rate of NSE in group C was higher than that in group B, and the difference was statistically significant. The positive rate of GFAP in group A was lower than that in group B (P 0.01). The positive rate of GFAP in group C was higher than that in group B. the difference was statistically significant (P 0.01). Conclusion: GFAP combined with EGF can induce the differentiation of BMSCs into neural cells. It tends to differentiate into neurons in serum-free condition and glial cell in high serum condition.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨一科;南昌大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)部;九江學(xué)院分析與檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：江西省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(20111BBG70022-2)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stemcells,BMSCs)是來源于中胚層的一類未分化間質(zhì)干細(xì)胞,具有很強(qiáng)的自我復(fù)制能力及多向分化潛能[1],在特定條件下可向外胚層的神經(jīng)元樣細(xì)胞、星形膠質(zhì)樣細(xì)胞和少突膠質(zhì)樣細(xì)胞分化[2]。在體外培養(yǎng)中,目前主要采用化學(xué)藥物和生物制劑誘導(dǎo)干

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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6 侯天勇;神經(jīng)干細(xì)胞源性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元假體的構(gòu)建及其對(duì)脊髓損傷的修復(fù)作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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3 王于藍(lán);徐，

本文編號(hào)：1361166