本文關(guān)鍵詞：人血小板生成素基因的克隆及CHO穩(wěn)定細(xì)胞系的建立　出處：《家畜生態(tài)學(xué)報(bào)》2013年02期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 人血小板生成素 基因克隆 CHO穩(wěn)定細(xì)胞系 Western blot

【摘要】：以人肝cDNA為模板克隆了人血小板生成素(Human Thrombopoietin,hTPO)基因,利用基因重組技術(shù)構(gòu)建了帶有新霉素抗性基因(neo)篩選標(biāo)記的pcDNA3.1(+)-hTPO真核表達(dá)載體,將重組質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,用鼠抗人TPO單抗Western blot檢測TPO蛋白的瞬時表達(dá);再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),應(yīng)用400μg/mL的G418篩選克隆,經(jīng)PCR及Western blot驗(yàn)證,獲得了3株hTPO蛋白表達(dá)水平不同的CHO細(xì)胞系,為獲得大量蛋白并進(jìn)行活性功能試驗(yàn)及臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The human liver cDNA as template and cloned human thrombopoietin (Human Thrombopoietin hTPO) gene, constructed with neomycin resistance gene by gene recombination technique (NEO) marker pcDNA3.1 (+) -hTPO eukaryotic expression vector, the recombinant plasmid was transiently transfected into 293T cells. The transient expression of mouse anti human TPO monoclonal antibody to detect TPO protein Western blot; then the recombinant plasmid was transfected into China hamster ovary cells (Chinese Hamster Ovary, CHO), using 400 g/mL G418 clones were screened by PCR and Western blot verification, obtained 3 strains of hTPO protein expression level in different CHO cell lines, to lay a foundation for obtaining large amount of protein and activity and function test clinical application.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心;濟(jì)南軍區(qū)軍犬訓(xùn)練大隊(duì);
【基金】：泰山學(xué)者海外特聘專家專項(xiàng) 國家奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng) 國家自然科學(xué)基金(31272586) 國家轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)(2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004) 濟(jì)南市高校院所主創(chuàng)新計(jì)劃(201004027,201202059,201102034)
【分類號】：R346
【正文快照】： 血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)是刺激巨核細(xì)胞生長[1]及分化的內(nèi)源性細(xì)胞因子,對巨核細(xì)胞生成的各階段均有刺激作用[2],包括前體細(xì)胞的增殖和多倍體巨核細(xì)胞的發(fā)育及成熟,從而升高血小板數(shù)目。另外,TPO可直接作用于多功能造血干細(xì)胞,提高其分化和自我復(fù)制的能力[3];而當(dāng)

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