本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在Bim介導(dǎo)缺氧致心肌細(xì)胞凋亡中的作用　出處：《中國病理生理雜志》2013年12期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在Bim介導(dǎo)缺氧致心肌細(xì)胞凋亡中的作用。方法:在體外原代培養(yǎng)出生1~3 d大鼠心肌細(xì)胞,并用抗α-橫紋肌肌動蛋白免疫組化法進(jìn)行鑒定。設(shè)計并化學(xué)合成3對靶向bim的siRNA,用脂質(zhì)體法將siRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞,篩選沉默效率最高的siRNA。實驗分組:(1)空白對照組;(2)缺氧組;(3)缺氧+脂質(zhì)體組;(4)缺氧+陰性對照siRNA組;(5)缺氧+Bim-siRNA組。MTT法觀察細(xì)胞活性;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化情況;Western blotting檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子caspase-12和三磷酸肌醇(IP3)的表達(dá)情況。結(jié)果:免疫組化鑒定證實大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)成功。在熒光顯微鏡下,轉(zhuǎn)染了陰性對照siRNA組的細(xì)胞中觀察到綠色熒光,即轉(zhuǎn)染成功;Western blotting結(jié)果顯示,Bim-siRNA轉(zhuǎn)染均能有效降低Bim蛋白的表達(dá),其中第2對沉默效率最高,達(dá)到86.73%。缺氧損傷導(dǎo)致心肌細(xì)胞活性明顯下降(P0.05),轉(zhuǎn)染Bim-siRNA后細(xì)胞活性較陰性對照組升高。缺氧細(xì)胞凋亡率較對照組明顯增加(P0.01),細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增高,而沉默bim的表達(dá)能降低細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。缺氧導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子caspase-12和IP3表達(dá)較空白對照組明顯上調(diào)(均P0.05),而抑制Bim表達(dá)后caspase-12和IP3表達(dá)明顯降低。結(jié)論:沉默bim的表達(dá)能有效抑制缺氧導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡的作用,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子caspase-12和IP3可能參與了Bim介導(dǎo)缺氧致心肌細(xì)胞凋亡的過程。這有望為臨床心肌缺血缺氧損傷的治療提供新思路。
[Abstract]:Objective: To investigate the role of endoplasmic reticulum stress in Bim mediated hypoxia induced cardiomyocyte apoptosis. Methods: the cardiac myocytes of 1~3 D rats were born in vitro, and were identified by anti alpha rhabdomyocyte actin immuno histochemical method. 3 pairs of target BIM siRNA were designed and chemically synthesized, and siRNA was transfected into cardiomyocytes by liposome method to screen the siRNA with the highest silence efficiency. Experimental groups: (1) blank control group; (2) hypoxia group; (3) hypoxia + liposome group; (4) anoxic + negative control group siRNA; (5) hypoxia +Bim-siRNA group. MTT method was used to observe cell viability. Flow cytometry was used to detect apoptosis rate and intracellular calcium concentration. Western blotting was used to detect the expression of caspase-12 and three phosphoinositide (IP3) in endoplasmic reticulum stress. Results: immunohistochemical identification confirmed that the primary culture of rat cardiomyocytes was successful. Under fluorescence microscope, green fluorescence was observed in transfected cells of negative control group siRNA, that is, transfection was successful. Western blotting results showed that Bim-siRNA transfection could effectively reduce the expression of Bim protein, and second of them had the highest silencing efficiency, reaching 86.73%. The activity of myocardial cells decreased significantly (P0.05). After Bim-siRNA transfection, the cell activity was higher than that of the negative control group. The apoptosis rate of hypoxia cells increased significantly compared with the control group (P0.01), the intracellular calcium concentration increased significantly, while the expression of BIM silencing decreased the apoptosis rate and intracellular calcium concentration. Hypoxia induced the expression of caspase-12 and IP3 in the endoplasmic reticulum stress markers significantly higher than that in the blank control group (P0.05), while the expression of caspase-12 and IP3 decreased significantly after the inhibition of Bim expression. Conclusion: silencing BIM expression can effectively inhibit the apoptosis of cardiomyocytes induced by hypoxia. Endoplasmic reticulum stress markers caspase-12 and IP3 may participate in the process of Bim mediated hypoxia induced cardiomyocyte apoptosis. This is expected to provide a new way of thinking for the treatment of myocardial ischemia and hypoxia injury.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科 江西省分子醫(yī)學(xué)重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81060013)
【分類號】：R363
【正文快照】： 唯BH3蛋白Bim(Bcl-2-interacting mediator ofcell death)是Bcl-2家族中BH3-only亞家族的成員,僅有1個BH3同源結(jié)構(gòu)域,是一種重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白。Bim廣泛分布于機(jī)體各種組織中,與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的功能密切相關(guān),具有促凋亡的活性。Bim的促凋亡活性受到嚴(yán)格調(diào)控,涉及多種信號通路

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1342530