本文關鍵詞：埃博拉病毒GP蛋白單克隆抗體的篩選和制備　出處：《浙江大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景埃博拉病毒病是由埃博拉病毒感染引起的致死性出血熱。1976年首次在扎伊爾和蘇丹出現(xiàn)。截止2013年,共造成2387人發(fā)病,死亡1310例,病死率54.9%。2014年埃博拉病毒再次爆發(fā),席卷西非,并跨越大洲,美國、英國、西班牙等相繼發(fā)生埃博拉病例。截止2015年12月8日,共發(fā)病28634例,死亡11314例,病死率仍高達39.5%。從埃博拉首次爆發(fā)至今,已經(jīng)過去了將近40年,目前國際上仍然沒有特異的治療手段和可供臨床使用的疫苗。埃博拉病毒病已經(jīng)成為國際性重大傳染病。及時有效的診斷能早期發(fā)現(xiàn)埃博拉病人,對病人進行早期隔離,減少互相傳播,能有效控制疾病的蔓延。埃博拉病毒病診斷依賴經(jīng)典的定量PCR技術,但該方法需要一定的設備和技術人員,并不能適用于全部地區(qū)�？焖�、靈敏、簡易的免疫學診斷能及早發(fā)現(xiàn)病人,控制傳染源,對疫情防控至關重要,目前正缺乏這種免疫診斷產(chǎn)品。埃博拉病毒病目前仍然沒有特效的治療方法。GP是埃博拉病毒感染入侵的主要蛋白,也是診斷及治療的主要靶蛋白。國際上針對GP蛋白已經(jīng)研制出三種抗體混合的藥物ZMapp,但是治療效果仍然有限且不確切。因而埃博拉GP蛋白單克隆抗體的繼續(xù)開發(fā),為埃博拉病毒病治療提供更多的備選抗體,就能大大地增大治療埃博拉病毒病的可能性。目的1)篩選和制備高效價的埃博拉GP蛋白單克隆抗體2)驗證單克隆抗體在ELISA, Western blot,細胞免疫熒光實驗、細胞免疫化學實驗中的應用。3)完成抗體的人源化方法設計靶肽,篩選抗體表位,人工合成埃博拉GP蛋白多肽。用多肽配合博奧龍公司生產(chǎn)的細胞因子佐劑免疫小鼠,通過5周的免疫法,制備免疫小鼠脾臟淋巴細胞,采用細胞融合技術,與SP20細胞融合,制備雜交瘤細胞。通過檢測和篩選,對雜交瘤細胞進行克隆化。采用小鼠腹腔注射雜交瘤細胞制備埃博拉GP蛋白單克隆抗體,對抗體進行純化和鑒定。完成單克隆抗體亞型鑒定,測序。完成抗體靈敏度和特異性檢測。用來自軍科院的表達GP蛋白的假病毒構建細胞模型。驗證單克隆抗體在ELISA, Western blot,細胞免疫熒光實驗、細胞免疫化學實驗中的應用。通過基因工程技術,對埃博拉GP蛋白單克隆抗體完成人源化改造。結果1)篩選和制備了兩株高效價的埃博拉GP蛋白單克隆抗體ZJEB8-01, ZJEDO-02.2) ZJEB8-01, ZJEDO-02檢測埃博拉GP蛋白的靈敏度達到1：10000,該兩個抗體能運用于ELISA, Western blot,細胞免疫熒光實驗、細胞免疫化學實驗。3) ZJEB8-01完成了人源化改造。結論篩選和制備了埃博拉GP蛋白單克隆抗體ZJEB8-01, ZJEDO-02。ZJEB8-01, ZJEDO-02檢測埃博拉GP蛋白靈敏度達到1：10000。該兩個抗體能運用于ELISA,Western blot.細胞免疫熒光實驗、細胞免疫化學實驗。ZJEB8-01人源化后,有望作為治療埃博拉病毒病的備選抗體藥物。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 李卓;楊安鋼;金伯泉;陳麗華;;埃博拉出血熱之殤——埃博拉病毒保護性抗原和中和抗體研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年01期

2 ZHANG YunFang;LI DaPeng;JIN Xia;HUANG Zhong;;Fighting Ebola with ZMapp: spotlight on plant-made antibody[J];Science China(Life Sciences);2014年10期

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本文編號：1331077