本文關(guān)鍵詞：HPV18E7重組質(zhì)粒的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)優(yōu)化

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【摘要】：目的構(gòu)建HPV18E7基因重組質(zhì)粒,并探索其在大腸桿菌中的最佳表達(dá)條件。方法以提取的HeLa細(xì)胞株中的DNA為模板PCR擴增HPV18E7基因;將HPV18E7基因與載體pET-32a(+)連接為重組質(zhì)粒pET-32a(+)-HPV18E7;將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21-DE3-pLysS細(xì)胞中,探索優(yōu)化表達(dá)的條件,以獲得大量HPV18E7致癌蛋白。結(jié)果 PCR擴增的目標(biāo)基因大小序列與HeLa細(xì)胞中的HPV18E7基因的大小序列一致。用LB培養(yǎng)基,IPTG和乳糖誘導(dǎo)表達(dá)顯示不同濃度、不同溫度、不同誘導(dǎo)起始量等表達(dá)量均不高,嘗試用ZYM-5052自動誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo),HPV18E7融合蛋白的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于用異丙基-β-D-硫代吡U半乳糖苷(IPTG)和乳糖誘導(dǎo)表達(dá)的表達(dá)量。結(jié)論測序正確的HPV18E7重組質(zhì)粒在自動誘導(dǎo)培養(yǎng)基ZYM-5052中獲得遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于用異丙基-β-D-硫代吡U半乳糖苷(IPTG)和乳糖誘導(dǎo)表達(dá)的HPV18E7融合蛋白。
【作者單位】： 重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院;南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：重慶市教育委員會科技研究項目(KJ110820)
【分類號】：R378
【正文快照】： 高危型人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus,HPV)持續(xù)感染宮頸是引起宮頸癌及癌前病變的直接病因[1]。HPVE7蛋白為宮頸癌發(fā)展的潛在標(biāo)志物,可以用新型雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測到各型HPV的重組E7蛋白以及宮頸涂片和宮頸癌細(xì)胞裂解物中的HPVE7蛋白[2]。HPV很難

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本文編號：1303570