本文關鍵詞：人主動脈瓣間質細胞原代培養(yǎng)及體外鈣化模型的建立

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【摘要】：目的原代培養(yǎng)人主動脈瓣間質細胞并建立體外瓣膜細胞鈣化模型,誘導人主動脈瓣間質細胞向成骨細胞分化,并觀察其表型變化。方法采用膠原酶兩次消化法原代培養(yǎng)人主動脈瓣間質細胞,取傳代3～7代間質細胞,隨機分為2組,實驗組以鈣化誘導培養(yǎng)基培養(yǎng),對照組以標準培養(yǎng)基培養(yǎng)。1周后,行von Kossa染色觀察鈣化結節(jié)形成情況,分光光度計測定堿性磷酸酶活性,免疫熒光染色檢測瓣膜間質細胞表型蛋白,real-time PCR及蛋白質印跡分析檢測成骨相關因子的表達,評價模型建立情況。結果培養(yǎng)1周后實驗組出現(xiàn)鈣化結節(jié),每孔鈣化結節(jié)數(shù)量[(51.20±14.31)個]高于對照組[(3.60±1.82)個],差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),同時實驗組堿性磷酸酶活性較對照組升高(約上升4倍,P0.05),細胞收縮表型平滑肌肌動蛋白(α-SMA)增高。Real-time PCR及蛋白質印跡分析提示,實驗組中成骨相關因子Runx2、osteocalcin及osteopontin在mRNA及蛋白水平均較對照組升高,磷酸化Smad1/5/8蛋白表達也同時升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論成功建立了人主動脈瓣間質細胞體外誘導鈣化模型,誘導后間質細胞呈現(xiàn)相對激活狀態(tài),表型向收縮表型和成骨表型轉化,為今后實驗提供了可靠的細胞模型。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院胸心外科;
【基金】：上海市基礎研究重點項目(11JC1415900)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 既往認為鈣化性主動脈瓣疾病(ealeifie aortievalve disease，CAVD)為不可調控的退行性改變，但近年來臨床研究發(fā)現(xiàn)，瓣膜鈣化是類似成骨樣分化的主動過程，并涉及多個成骨相關因子的調節(jié)(’」。瓣膜間質細胞(valve interstitial CellS，VICS)向成骨細胞樣細胞表型的主動轉化

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