本文關(guān)鍵詞：人主動(dòng)脈瓣間質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)及體外鈣化模型的建立

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【摘要】：目的原代培養(yǎng)人主動(dòng)脈瓣間質(zhì)細(xì)胞并建立體外瓣膜細(xì)胞鈣化模型,誘導(dǎo)人主動(dòng)脈瓣間質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,并觀察其表型變化。方法采用膠原酶兩次消化法原代培養(yǎng)人主動(dòng)脈瓣間質(zhì)細(xì)胞,取傳代3～7代間質(zhì)細(xì)胞,隨機(jī)分為2組,實(shí)驗(yàn)組以鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng),對(duì)照組以標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基培養(yǎng)。1周后,行von Kossa染色觀察鈣化結(jié)節(jié)形成情況,分光光度計(jì)測(cè)定堿性磷酸酶活性,免疫熒光染色檢測(cè)瓣膜間質(zhì)細(xì)胞表型蛋白,real-time PCR及蛋白質(zhì)印跡分析檢測(cè)成骨相關(guān)因子的表達(dá),評(píng)價(jià)模型建立情況。結(jié)果培養(yǎng)1周后實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)鈣化結(jié)節(jié),每孔鈣化結(jié)節(jié)數(shù)量[(51.20±14.31)個(gè)]高于對(duì)照組[(3.60±1.82)個(gè)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),同時(shí)實(shí)驗(yàn)組堿性磷酸酶活性較對(duì)照組升高(約上升4倍,P0.05),細(xì)胞收縮表型平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)增高。Real-time PCR及蛋白質(zhì)印跡分析提示,實(shí)驗(yàn)組中成骨相關(guān)因子Runx2、osteocalcin及osteopontin在mRNA及蛋白水平均較對(duì)照組升高,磷酸化Smad1/5/8蛋白表達(dá)也同時(shí)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功建立了人主動(dòng)脈瓣間質(zhì)細(xì)胞體外誘導(dǎo)鈣化模型,誘導(dǎo)后間質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)相對(duì)激活狀態(tài),表型向收縮表型和成骨表型轉(zhuǎn)化,為今后實(shí)驗(yàn)提供了可靠的細(xì)胞模型。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院胸心外科;
【基金】：上海市基礎(chǔ)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(11JC1415900)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【正文快照】： 既往認(rèn)為鈣化性主動(dòng)脈瓣疾病(ealeifie aortievalve disease，CAVD)為不可調(diào)控的退行性改變，但近年來(lái)臨床研究發(fā)現(xiàn)，瓣膜鈣化是類(lèi)似成骨樣分化的主動(dòng)過(guò)程，并涉及多個(gè)成骨相關(guān)因子的調(diào)節(jié)(’」。瓣膜間質(zhì)細(xì)胞(valve interstitial CellS，VICS)向成骨細(xì)胞樣細(xì)胞表型的主動(dòng)轉(zhuǎn)化

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