本文關(guān)鍵詞：腫瘤壞死因子受體2突變載體對巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響

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【摘要】：目的探討腫瘤壞死因子受體超家族1B(TNFRSF1B)196位基因多態(tài)性(T突變?yōu)镚)與巨噬細(xì)胞TNF/TNFR2信號通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的相關(guān)性。方法運用基因重組技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA6.0-TNFR2196Met和pcDNA6.0-TNFR2196Arg,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別轉(zhuǎn)染至巨噬細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染48 h后使用殺稻瘟菌素抗性篩選4周,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。將酶消化法培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞分為四組:空白對照組、pcDNA6.0空質(zhì)粒組、pcDNA6.0-TNFR2196Met組及pcDNA6.0-TNFR2196Arg組。采用酶切及測序法鑒定重組質(zhì)粒,RT-PCR檢測腫瘤壞死因子受體2(TNFR2)、cIAP1、cIAP2mRNA的變化;Western blot檢測p-JNK、cIAP1、cIAP2、TNFR2及核因子κB(NF-κB)的蛋白表達(dá);ELISA檢測細(xì)胞上清液可溶性TNFR2(sTNFR2)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和白細(xì)胞介素6(IL-6)水平。結(jié)果酶切測序結(jié)果顯示成功構(gòu)建了TNFR2基因196Met和196Arg表達(dá)載體。轉(zhuǎn)染到巨噬細(xì)胞后,與空白對照組和pcDNA6.0空質(zhì)粒組比較,pcDNA6.0-TNFR2196Arg組、pcDNA6.0-TNFR2196Met組TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和p-JNK的表達(dá)增高(P0.05);與pcDNA6.0-TNFR2196Met組比較,pcDNA6.0-TNFR2196Arg組TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和pJNK的表達(dá)明顯降低(P0.05),TNFR2196Arg介導(dǎo)的NF-κB活性顯著降低。結(jié)論成功構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)TNFR2196Met、TNFR2196Arg載體,TNFR2突變通過TNF/TNFR2信號通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng),可能是參與慢性炎癥性疾病的作用機制。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：山西省科技攻關(guān)項目(20090311057-4)
【分類號】：R363
【正文快照】： 腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)誘導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在冠心病慢性炎癥過程中起關(guān)鍵作用。腫瘤壞死因子受體2(tumor necrosis factor repor-tor 2,TNFR2)由腫瘤壞死因子超家族成員1B基因(tumor necrosis factor receptor superfamily 1B,TNFRSF1B)編碼,分為膜型和可溶

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本文編號：1289014