本文關(guān)鍵詞：LIM礦化蛋白-1對間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化影響的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 基因治療 LIM礦化蛋白 組織工程 間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化

【摘要】：目的:構(gòu)建LIM礦化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)的真核表達(dá)質(zhì)粒,并在兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrow mesenchymal stem cells,BMSCs)內(nèi)表達(dá),研究LMP-1對體外培養(yǎng)BMSCs成骨分化的影響。方法:RT-PCR克隆hLMP-1和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2),并構(gòu)建pIRES2-EGFP-LMP-1及pIRES2-EGFP-BMP-2重組質(zhì)粒。分離培養(yǎng)BMSCs,脂質(zhì)體介導(dǎo)下將pIRES2-EGFP-LMP-1、pIRES2-EGFP-BMP-2和pIRES2-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs。7 d后收集細(xì)胞,RT-PCR比較hLMP-1、hBMP-2及Ⅰ型膠原的表達(dá),檢測堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,免疫組化染色比較骨鈣素表達(dá)。結(jié)果:pIRES2-EGFP-LMP-1和pIRES2-EGFP-BMP-2重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染BMSCs,RT-PCR證實(shí)表達(dá)目的基因,hLMP-1和hBMP-2轉(zhuǎn)染組可以明顯促進(jìn)細(xì)胞分泌ALP的活性,誘導(dǎo)Ⅰ型膠原和骨鈣素的表達(dá)。結(jié)論:LMP-1可以促進(jìn)BMSCs向成骨細(xì)胞分化。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院骨科;重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院骨科;
【分類號】：R329
【正文快照】： LIM礦化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是Boden等[1]在1998年通過差顯PCR的方法,從小鼠成骨細(xì)胞中克隆并命名的。實(shí)驗(yàn)證實(shí)其在成骨細(xì)胞分化早期就有表達(dá),并且可能參與了骨形成2種方式的最后共同通路。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)其可以促進(jìn)成骨祖細(xì)胞和外周血來源的間質(zhì)干

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