本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞神經(jīng)分化過程中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白分布的變化及意義

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【摘要】：目的探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞神經(jīng)分化過程中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamy-cin,mTOR)分布的變化及意義。方法常規(guī)體外培養(yǎng)大鼠MSCs,采用β-巰基乙醇誘導MSCs分化為神經(jīng)細胞。實驗分MSCs空白對照組、二甲基亞砜(DMSO)陰性對照組、β-巰基乙醇誘導組、不同濃度雷帕霉素干預組、不同濃度雷帕霉素干預+β-巰基乙醇誘導組。采用免疫熒光法檢測誘導前后mTOR在細胞內(nèi)的分布,激光共聚焦顯微鏡觀察照相;Westernblot法檢測誘導前后神經(jīng)細胞相關(guān)蛋白和mTOR通路蛋白的表達。結(jié)果①誘導前mTOR主要在MSCs細胞核內(nèi)點狀分布,細胞質(zhì)也有少量的分布;誘導后核內(nèi)熒光信號減弱,mTOR向細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移。雷帕霉素處理后,隨著雷帕霉素濃度的提高(10～30μmol/L),mTOR向細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移越明顯。雷帕霉素濃度超過50μmol/L后,細胞形態(tài)變圓,部分細胞脫壁,死亡率顯著增加(P0.05)。②β-巰基乙醇可誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)細胞,誘導后神經(jīng)細胞Tau蛋白、MAP-2蛋白表達顯著增加。雷帕霉素(10～30μmol/L)干預后,隨著雷帕霉素濃度(10～20μmol/L)的提高,Tau蛋白、MAP-2蛋白表達逐漸增加,30μmol/L時Tau蛋白、MAP-2蛋白表達下降(P0.05)。③Western blot檢測結(jié)果提示,誘導前后總mTOR表達不變;磷酸化mTOR、磷酸化p70S6K、磷酸化4EBP1誘導后較誘導前表達下降(P0.05),雷帕霉素干預后下調(diào)更加顯著(P0.05)。結(jié)論 mTOR在MSCs神經(jīng)分化過程中由細胞核內(nèi)向細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移,活性下降,表達下調(diào),提示mTOR在MSCs神經(jīng)分化過程中可能發(fā)揮了重要作用。
【作者單位】： 鄭州大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學基金(81071114)~~
【分類號】：R322.8
【正文快照】： 雷帕霉素靶蛋白(taeget of rapamycin,TOR)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類進化上非常保守的蛋白激酶家族,廣泛存在于各種生物細胞中。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一種絲氨酸-蘇氨酸激酶,可調(diào)節(jié)細胞生長、增殖及一些細胞內(nèi)活動,如mRNA轉(zhuǎn)錄及翻譯、自噬

【參考文獻】

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1 景黎君;賈永林;魯晶晶;韓瑞;王舒陽;李盡義;彭濤;賈延R，

本文編號：1272171