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  本文關(guān)鍵詞：IRE1α重組腺病毒載體對(duì)ATDC5軟骨干細(xì)胞增殖及凋亡的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建重組人IRE1α腺病毒,觀察其對(duì)軟骨干細(xì)胞ATDC5增殖與凋亡的影響。方法應(yīng)用pAdEasyTM腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建包含全長(zhǎng)IRE1α基因和RNase+Kinase核心結(jié)構(gòu)域的重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-IRE1α、pAdTrack-R+K,通過(guò)電轉(zhuǎn)法分別與腺病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1進(jìn)行同源重組,獲得重組腺病毒pAd-IRE1α、pAd-R+K。隨后在HEK-293細(xì)胞中包裝并擴(kuò)增重組腺病毒顆粒Ad-IRE1α、Ad-R+K。用直接PCR法鑒定重組腺病毒,后者體外感染軟骨干細(xì)胞ATDC5,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白(GFP)感染效率,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)和非ERS狀態(tài)時(shí)重組腺病毒對(duì)ATDC5細(xì)胞增殖和凋亡的影響。結(jié)果酶切鑒定和PCR證實(shí)成功構(gòu)建了重組腺病毒質(zhì)粒pAd-IRE1α、pAd-R+K。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,在ERS狀態(tài)時(shí),重組腺病毒質(zhì)粒Ad-IRE1α、Ad-R+K感染后ATDC5細(xì)胞G1期比例明顯降低,S期細(xì)胞比例明顯升高(P0.05),細(xì)胞凋亡率明顯增高(P0.05)。結(jié)論含IRE1α基因的重組腺病毒感染可促進(jìn)ATDC5細(xì)胞的增殖和凋亡。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)及遺傳學(xué)教研室;重慶市璧山縣人民醫(yī)院輸血科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81171697) 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(NCET-12-1090) 重慶市高等學(xué)校優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(2011-65)~~
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： IRE1α(typeⅠtransmembrane protein kinase/endoribonuclease)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的一種跨膜蛋白,為具有激酶(kinase)和核糖核酸內(nèi)切酶(RNase)活性的雙功能酶。細(xì)胞處于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulum stress,ERS)時(shí),可誘導(dǎo)IRE1α的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔側(cè)結(jié)構(gòu)域發(fā)生二聚化,激活胞質(zhì)的蛋白激

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