本文關鍵詞：剛地弓形蟲致密顆粒蛋白GRA2全基因的原核重組表達

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【摘要】：目的克隆弓形蟲RH株致密顆粒蛋白2(GRA2)的全長基因,在大腸埃希菌工程菌中重組表達GST-HisGRA2融合蛋白。方法提取弓形蟲總RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,PCR擴增GRA2基因全長,與pET-41Ek/LIC載體通過基因重組直接連接,在大腸埃希菌RosettaTM(DE3)pLysS工程菌中誘導表達重組融合蛋白,然后采用SDS-PAGE和Western blot鑒定重組蛋白產(chǎn)物。結(jié)果 PCR鑒定弓形蟲GRA2全基因重組表達質(zhì)粒構(gòu)建正確;誘導表達的GSTHis-GRA2融合重組蛋白分子質(zhì)量單位為52ku,與預測值相符。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了弓形蟲GRA2全基因重組蛋白質(zhì)粒,該質(zhì)粒能表達GRA2蛋白,為研究GRA2與宿主細胞的相互作用奠定了基礎。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學附屬北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學研究所;熱帶病防治研究北京市重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81071375,81301404) 北京市自然科學基金項目(No.7132042) 首都醫(yī)科大學基礎-臨床科研合作基金項目(No.13JL16) 首都醫(yī)科大學附屬北京友誼醫(yī)院科研啟動基金項目(No.2011_30yykyqd)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種細胞內(nèi)寄生原蟲,可引起人獸共患弓形蟲病。人類對弓形蟲普遍易感,我國人群感染率為4.0%~9.0%,孕婦感染率高達6.6%~32.9%[1]。孕婦感染弓形蟲可以引起胎兒嚴重的先天感染,導致流產(chǎn)、死胎、畸形、智力障礙。對于免疫力低下者,如器官移植或AI

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