本文關鍵詞：E8.5-E12.5大鼠胚胎整體原位雜交技術

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【摘要】：目的:通過優(yōu)化實驗條件,建立大鼠胚胎整體原位雜交方法。方法:E8.5-E10.5大鼠胚胎4%多聚甲醛固定6 h,不經蛋白酶K消化;E11.5-E12.5胚胎4%多聚甲醛固定過夜,蛋白酶K系列稀釋實驗確定消化濃度和時間。E8.5-E12.5胚胎預雜交2 h,地高辛標記的甘油二酯激酶ζ(DGKζ)寡核苷酸探針雜交24 h,山羊血清封閉2.5～3 h,地高辛抗體4℃過夜,冷TBST和NTMT漂洗1～2 h,NBT/BCIP避光顯色。應用免疫組織化學方法觀察DGKζ在E12.5大鼠胚胎組織的表達。結果:DGKζ在不同胚齡大鼠胚胎均有清晰的雜交信號,主要集中在神經系統(tǒng);E12.5大鼠胚胎腦泡、背根神經節(jié)有較強表達,與免疫組化結果一致。結論:本研究建立了簡便、可行、重復性高的E8.5-E12.5大鼠胚胎整體原位雜交方法。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學組織胚胎學教研室;山西焦煤西山煤電集團公司職工總醫(yī)院神經內科;
【基金】：山西省自然科學基金(2008011079-2) 山西醫(yī)科大學科技創(chuàng)新基金(01200719)
【分類號】：R321
【正文快照】： 胚胎發(fā)生是一個復雜的生物過程,多種基因共同參與調節(jié)。脊椎動物的胚胎整體原位雜交技術始于二十世紀九十年代,可以直觀顯示基因在胚胎發(fā)育過程中的時空表達,是一種能精確反映基因表達三維信息的技術手段[1]。胚胎整體原位雜交實驗繁雜、過程較長,有多個重要步驟影響最終實驗

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 吳燕,馬子敏,劉淑紅,范文紅,范明;小鼠胚胎整體原位雜交實用技術的建立[J];解剖學報;2004年04期

2 肖翠英,Ditsa Levanon,張思仲,Yoram Groner;一種進行基因表達研究的有效技術——小鼠全胚胎RNA原位雜交[J];中華醫(yī)學遺傳學雜志;2004年01期

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前4條

1 樊z巖，

本文編號：1241448