本文關鍵詞：IL-4、IL-13蛋白表達及抗IL-4、IL-13人源單鏈抗體的篩選

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【摘要】：目的:表達IL-4和IL-13蛋白,從人源單鏈抗體文庫中分別篩選抗IL-4和抗IL-13單鏈抗體。方法:采用RT-PCR從健康志愿者外周血單核細胞(PBMC)mRNA中擴增IL-4和IL-13 cDNA;構建硫氧還蛋白融合表達載體,轉化大腸桿菌BL21,IPTG誘導表達并對表達產(chǎn)物進行純化鑒定。以生物素化的IL-4和IL-13為抗原從前期構建的人源抗體文庫中采用噬菌體展示技術分別篩選抗IL-4和抗IL-13人源單鏈抗體(scFv)。結果:擴增的IL-4 cDNA大小為280 bp,表達的融合蛋白大小為27 kD左右。擴增的IL-13 cDNA大小為252 bp,表達的融合蛋白大小為25 kD左右。分別以生物素化的IL-4和IL-13蛋白為抗原,采用噬菌體展示技術對人源抗體文庫進行3輪富集后,分別有大約37%的scFvs與IL-4有結合特性,有約27%的scFvs與IL-13有結合特性。篩選了4株分別與IL-4和IL-13結合能力強的單鏈抗體進行了Western blot鑒定和測序。結論:成功篩選到抗IL-4和抗IL-13人源性單鏈抗體。
【作者單位】： 瀘州醫(yī)學院基礎醫(yī)學院;
【基金】：國家自然科學基金(31000415) 四川省青年基金(2012JQ0018) 瀘州市科技局項目(2010-S-13)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 白細胞介素(IL)IL-4和IL-13表達于2型輔助性T細胞(Th2)和肥大細胞上,是遺傳性過敏癥和過敏性炎癥疾病如哮喘發(fā)病機制中關鍵的細胞因子[1,2]。IL-4和IL-13都可促進急性炎性過程和呼吸道基本結構的變化,促進其受體在多種類型的細胞上表達[3]。遺傳性過敏癥和過敏性炎癥疾病的一

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本文編號：1232102