本文關(guān)鍵詞：IL-4、IL-13蛋白表達(dá)及抗IL-4、IL-13人源單鏈抗體的篩選

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【摘要】：目的:表達(dá)IL-4和IL-13蛋白,從人源單鏈抗體文庫(kù)中分別篩選抗IL-4和抗IL-13單鏈抗體。方法:采用RT-PCR從健康志愿者外周血單核細(xì)胞(PBMC)mRNA中擴(kuò)增IL-4和IL-13 cDNA;構(gòu)建硫氧還蛋白融合表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化鑒定。以生物素化的IL-4和IL-13為抗原從前期構(gòu)建的人源抗體文庫(kù)中采用噬菌體展示技術(shù)分別篩選抗IL-4和抗IL-13人源單鏈抗體(scFv)。結(jié)果:擴(kuò)增的IL-4 cDNA大小為280 bp,表達(dá)的融合蛋白大小為27 kD左右。擴(kuò)增的IL-13 cDNA大小為252 bp,表達(dá)的融合蛋白大小為25 kD左右。分別以生物素化的IL-4和IL-13蛋白為抗原,采用噬菌體展示技術(shù)對(duì)人源抗體文庫(kù)進(jìn)行3輪富集后,分別有大約37%的scFvs與IL-4有結(jié)合特性,有約27%的scFvs與IL-13有結(jié)合特性。篩選了4株分別與IL-4和IL-13結(jié)合能力強(qiáng)的單鏈抗體進(jìn)行了Western blot鑒定和測(cè)序。結(jié)論:成功篩選到抗IL-4和抗IL-13人源性單鏈抗體。
【作者單位】： 瀘州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31000415) 四川省青年基金(2012JQ0018) 瀘州市科技局項(xiàng)目(2010-S-13)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 白細(xì)胞介素(IL)IL-4和IL-13表達(dá)于2型輔助性T細(xì)胞(Th2)和肥大細(xì)胞上,是遺傳性過(guò)敏癥和過(guò)敏性炎癥疾病如哮喘發(fā)病機(jī)制中關(guān)鍵的細(xì)胞因子[1,2]。IL-4和IL-13都可促進(jìn)急性炎性過(guò)程和呼吸道基本結(jié)構(gòu)的變化,促進(jìn)其受體在多種類型的細(xì)胞上表達(dá)[3]。遺傳性過(guò)敏癥和過(guò)敏性炎癥疾病的一

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本文編號(hào)：1232102