發(fā)布時間：2017-11-20 00:15

  本文關(guān)鍵詞：利用體外甲狀腺濾泡模型研究甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控甲狀腺功能中的作用

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【摘要】：目的體外構(gòu)建二腔室甲狀腺濾泡模型,通過慢病毒載體過表達(dá)甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子(TTF-1、PAX-8)后檢測模型二腔室中甲狀腺激素的合成變化,以探討甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控甲狀腺功能中的作用。方法1.取對數(shù)生長期的人甲狀腺上皮細(xì)胞株,將其培養(yǎng)于Transwell培養(yǎng)板(Corningò3450)內(nèi)用于構(gòu)建二腔室模型,待細(xì)胞完全融合隔離了上下腔后,便形成了二腔室模型。以此模型為研究對象,以培養(yǎng)于6孔板的單層細(xì)胞作為對照,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加合適濃度碘、1m IU/L TSH,繼續(xù)培養(yǎng)36小時,采用直接化學(xué)發(fā)光法檢測培養(yǎng)液中的FT3、FT4、Tg,采用砷鈰催化分光光度測定方法檢測碘濃度。2.根據(jù)Gen Bank的基因序列設(shè)計引物,采用PCR克隆TTF-1、PAX-8序列全長,經(jīng)Eco RI和Bam HI雙酶切的片段與p LVX-puro連接后轉(zhuǎn)化E.coli感受態(tài)細(xì)胞,在含有氨芐青霉素的LB平板上篩選陽性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行測序鑒定。重組慢病毒載體構(gòu)建完成后,應(yīng)用PEI共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞獲得重組慢病毒,獲得的病毒上清經(jīng)滴度測定后可轉(zhuǎn)染二腔室模型。3.用空載慢病毒轉(zhuǎn)染的二腔室模型作為對照組,以過表達(dá)(TTF1、PAX-8)慢病毒轉(zhuǎn)染的二腔室模型作為實驗組,采用直接化學(xué)發(fā)光法檢測培養(yǎng)液中的FT3、FT4、Tg,采用砷鈰催化分光光度測定方法檢測碘的濃度。結(jié)果1.二腔室模型FT3、FT4合成及攝碘量比單層細(xì)胞組顯著增加;2.過表達(dá)TTF-1及PAX-8,FT3、FT4的合成增多、攝碘量增多;3.過表達(dá)TTF-1時FT3、FT4合成量顯著多于過表達(dá)PAX-8,但碘的攝取量兩者沒有明顯區(qū)別。結(jié)論1.二腔室模型能夠模擬甲狀腺濾泡結(jié)構(gòu),具備合成甲狀腺激素及攝碘功能。2.利用二腔室模型,證實了甲狀腺濾泡腔內(nèi)存在FT3、FT4。3.TTF-1或PAX-8過表達(dá)上調(diào)甲狀腺激素合成,且TTF-1的作用顯著大于PAX-8。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R3416

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本文編號：1205401