本文關鍵詞：短寡核苷酸鏈高效轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)惡性瘧原蟲的研究

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【摘要】：5%山梨醇連續(xù)2次同步化惡性瘧原蟲培養(yǎng)物(8 h窗口),培養(yǎng)16 h后,直接孵育組(A組)將50μl含寡核苷酸培養(yǎng)基與450μl惡性瘧原蟲培養(yǎng)物(5%蟲血率,1%血壓積)混合孵育,Entranster-R試劑轉(zhuǎn)染組(B組)將50μl轉(zhuǎn)染復合物(含寡核苷酸鏈和轉(zhuǎn)染試劑)與450μl惡性瘧原蟲培養(yǎng)物混合孵育,培養(yǎng)5 h后重懸,分別取出250μl,1 500×g離心3 min,收集沉淀,進行熒光顯微鏡觀察和流式細胞術檢測轉(zhuǎn)染效率。剩余細胞經(jīng)RPMI 1640培養(yǎng)基洗滌1次后,加入500μl含2%新鮮紅細胞的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)12 h至第2個細胞周期,再次進行流式細胞術檢測。熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,Entranster-R試劑轉(zhuǎn)染組可明顯觀察到感染紅細胞中標記探針的綠色熒光,而直接孵育組未觀察到綠色熒光。流式細胞術檢測結(jié)果表明,Entranster-R試劑轉(zhuǎn)染組小分子寡核苷酸轉(zhuǎn)染瘧原蟲的效率可達(47.40±3.39)%,高于普通孵育法[(0.60±0.27)%],且該組在第2個周期中維持轉(zhuǎn)染率約(26.85±2.90)%,而直接孵育組在第2個細胞周期則幾乎檢測不到。提示利用納米轉(zhuǎn)染試劑Entranster-R能提高寡核苷酸轉(zhuǎn)染瘧原蟲的效率。
【作者單位】： 湖州師范學院醫(yī)學院病原生物與免疫學教研室;中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所;北京協(xié)和醫(yī)學院基礎學院微生物與寄生蟲學系;
【基金】：國家自然科學基金(No.81000742)~~
【分類號】：R382
【正文快照】： 瘧疾是由瘧原蟲感染而引起的嚴重的寄生蟲傳染病,據(jù)2012年WHO瘧疾報告顯示,2010年死亡病例約66萬。感染 人類的幾種瘧原蟲中,惡性瘧原蟲危害最大[1]。自Gardner等[2]在2002年公布惡性瘧原蟲基因組數(shù)據(jù)以來,瘧原蟲的基因功能研究取得很大進展。縱觀近10多年的發(fā)展,基因敲除技

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