本文關(guān)鍵詞：流體靜壓力及雌激素共同作用對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨及成軟骨分化的影響

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【摘要】：目的觀察流體靜壓力聯(lián)合雌激素對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、細(xì)胞骨架及成骨、成軟骨向分化的影響,檢測這兩種刺激共同作用是否具有生物疊加效應(yīng)。方法采用全骨髓貼壁分離法分離培養(yǎng)BMSCs,流式細(xì)胞儀進(jìn)行BMSCs表面標(biāo)志物分子鑒定。細(xì)胞分為對照組(C組)、1 nmol/L17β-雌二醇作用組(E組)、1 nmol/L雌激素受體拮抗劑TAM作用組(T組)、90 kPa壓力加載1 h組(P組)、17β-雌二醇預(yù)處理12 h后再加壓1 h組(P+E組)以及TAM預(yù)處理12 h后再加壓1 h組(P+T組)。流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的細(xì)胞周期變化;FITC-鬼筆環(huán)肽染色后激光共聚焦顯微鏡下觀察F-actin細(xì)胞骨架表達(dá)與重組情況;各組細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)7 d和14 d后茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)形成量、Real-time PCR檢測成骨細(xì)胞標(biāo)志基因Col I、ON、OPN及BSP的mRNA表達(dá);成軟骨誘導(dǎo)14 d和28 d后甲苯胺藍(lán)染色檢測蛋白多糖表達(dá)、Real-time PCR檢測成軟骨細(xì)胞標(biāo)志基因Sox9、Aggrecan及ColⅡ的mRNA表達(dá)。采用SPSS 16.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,后續(xù)Dunnett t檢驗(yàn)進(jìn)行各時間點(diǎn)上實(shí)驗(yàn)組與空白對照組數(shù)據(jù)之間及各實(shí)驗(yàn)組之間的組間比較。結(jié)果流體靜壓力(90 kPa,1 h)及1 nmol/L 17β-雌二醇作用下細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞骨架的活性均增強(qiáng),但并不具有生物整合效應(yīng)。成骨誘導(dǎo)14 d后,鈣結(jié)節(jié)形成。Real-time PCR結(jié)果顯示,17β-雌二醇作用組中成骨標(biāo)志基因Col I、ON、OPN及BSP的表達(dá)水平顯著增加。兩種刺激在成骨誘導(dǎo)分化7 d時均可提高標(biāo)志基因的表達(dá),具有生物協(xié)同效應(yīng),但成骨誘導(dǎo)14 d時兩者則表現(xiàn)出相互拮抗的作用。成軟骨誘導(dǎo)28 d后,甲苯胺藍(lán)染色陽性。成軟骨誘導(dǎo)過程中,單純壓力刺激組成軟骨標(biāo)志基因Sox9、Aggrecan及ColⅡ的表達(dá)顯著升高,雌激素預(yù)調(diào)則削弱壓力對間充質(zhì)干細(xì)胞的促成軟骨分化作用。結(jié)論流體靜壓力及雌激素僅在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化早期表現(xiàn)生物整合效應(yīng),而在增殖、細(xì)胞骨架活性方面則無此效應(yīng)。在成骨分化晚期及成軟骨分化中兩種刺激因素表現(xiàn)出拮抗作用,雌激素可促成骨分化,而壓力則表現(xiàn)為促成軟骨分化的作用。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院 急診與綜合臨床科;第四軍醫(yī)大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)系 流行病學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30670518,31170888)
【分類號】：R329
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)是骨髓中分離出的纖維樣非造血干細(xì)胞,具有分化為多種中胚層細(xì)胞的潛能[1-2]。作為骨形成過程中的種子細(xì)胞,BMSCs的分化程度以及分化方向在一定程度上決定了骨組織的結(jié)構(gòu)和功能。機(jī)體內(nèi)骨組織受到機(jī)械信號、生長因

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1192197