本文關(guān)鍵詞：人源性EGFL6的重組表達(dá)及多克隆抗體制備研究

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【摘要】：目的研究發(fā)現(xiàn)人源性類表皮生長(zhǎng)因子域EGFL6可促進(jìn)組織血管新生并在腫瘤組織細(xì)胞中表達(dá)上調(diào),預(yù)示其與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),本研究通過對(duì)EGFL6基因克隆,表達(dá)和純化并制備其多克隆抗體,為深入研究EGFL6相關(guān)功能奠定基礎(chǔ)。方法用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)腫瘤及正常組織細(xì)胞系中EGFL6基因表達(dá)水平,并擴(kuò)增EGFL6基因片段,采用基因重組技術(shù)構(gòu)建EGFL6原核表達(dá)載體,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后利用鎳離子柱親和純化EGFL6重組蛋白,免疫昆明小鼠制備抗EGFL6多克隆抗體,ELISA、Western blot方法檢測(cè)抗體靈敏度和特異性。結(jié)果 RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EGFL6在腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)375及SKOV3中高表達(dá)。成功構(gòu)建表達(dá)載體pET32a(+)-EGFL6,實(shí)現(xiàn)可溶性EGFL6蛋白的誘導(dǎo)表達(dá),純化和抗體制備。SDS-PAGE和Western blot證實(shí),重組EGFL6蛋白質(zhì)與預(yù)期結(jié)果一致,抗血清能夠特異地識(shí)別重組片段蛋白,重組全長(zhǎng)蛋白及細(xì)胞系中天然EGFL6蛋白。結(jié)論 qRT-PCR檢測(cè)得知EGFL6在腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)375及SKOV3中表達(dá)量較高,并成功實(shí)現(xiàn)了EGFL6的重組表達(dá),抗體制備及初步應(yīng)用研究。
【作者單位】： 暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助(21612112) 國(guó)家863項(xiàng)目(2009AA02Z112)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 類表皮生長(zhǎng)因子(EGF)域家族蛋白在參與調(diào)控細(xì)胞周期,增殖和發(fā)育過程中起著非常重要的作用[1]。EGFL6作為一種新的類表皮生長(zhǎng)因子(EGF)域超家族成員由Yeung等(1999年)首先發(fā)現(xiàn),并證實(shí)其定位于人X染色體[2]。EGFL6由于其同時(shí)具有EGF結(jié)構(gòu)域和MAM結(jié)構(gòu)域,又被命名為MAEG[3]。新近

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 晁耐霞;肖飛;蔣日婷;黃天明;趙飛蘭;曾慶堂;李日倫;謝小薰;羅國(guó)容;;肝癌相關(guān)抗原Kinectin的多克隆抗體制備、鑒定及初步應(yīng)用[J];免疫學(xué)雜志;2011年01期

2 王旭;逄越;王惠國(guó);馬彪;劉慶平;李文哲;;B細(xì)胞特異激活蛋白基因Pax5原核表達(dá)、純化及多克隆抗體制備研究[J];免疫學(xué)雜志;2011年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 劉麗娜;朱軍民;叢延廣;王長(zhǎng)軍;;2型豬鏈球菌溶血素及其抗血清的免疫保護(hù)活性研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2011年11期

2 劉麗娜;朱軍民;叢延廣;胡福泉;;2-型豬鏈球菌分泌性保護(hù)性抗原RfeA的確認(rèn)[J];免疫學(xué)雜志;2011年08期

3 胡樂琴;柳俊秀;王權(quán);何培民;;抗大田軟海綿酸單克隆抗體的制備及免疫學(xué)特性分析[J];免疫學(xué)雜志;2011年09期

4 馬彪;逄越;王旭;劉慶平;李文哲;;Pax5對(duì)B細(xì)胞分化發(fā)育調(diào)控作用的研究進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2012年07期

5 焦鑫艷;馬彪;王旭;劉慶平;李文哲;;Fut8基因通過促進(jìn)VLA-4/VCAM-1表達(dá)影響B(tài)細(xì)胞發(fā)育[J];免疫學(xué)雜志;2012年08期

6 樸君;武翼;樸敬愛;李文哲;;血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子胞外區(qū)基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)[J];免疫學(xué)雜志;2013年02期

7 沈雁兵;馬德賓;鄒麗云;謝諄怡;萬瑛;陳平;;肝細(xì)胞性肝癌相關(guān)miRNA的篩選和鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2013年04期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 黃天明;黃紹明;莫發(fā)榮;何少健;周素芳;鄧瓊英;李松峰;黃敏麗;李山;薛慧琴;梁皓;范容;閆磊;謝小薰;羅國(guó)容;;肝癌相關(guān)抗原kinectin基因片斷的重組表達(dá)[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年03期

2 謝小薰,王延偉,黎鵬,藍(lán)玲,趙飛蘭,莫發(fā)榮,范容,羅國(guó)容;肝細(xì)胞癌相關(guān)抗原kinectin的血清學(xué)分析[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2003年02期

3 王迎昕;郜恒駿;陳錫美;孟遜;;兔抗人PIWIL4蛋白多克隆抗體的制備和鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2008年01期

4 史繼靜;劉朝奇;李斌;汪錦江;陳晶;;HIV-1蛋白酶基因的克隆、蛋白表達(dá)及抗體制備[J];免疫學(xué)雜志;2010年02期

5 王宇;田志革;歐陽鳳菊;郭巍;相文華;王世澤;曲娟娟;;馬乙型腦炎病毒E蛋白的原核表達(dá)及間接ELISA的初步應(yīng)用[J];免疫學(xué)雜志;2010年07期

6 袁向亮;沈立松;;Pax5在早期B細(xì)胞定向分化發(fā)育中的作用[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年04期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳曉華;蔡國(guó)平;;人致肺纖維化因子的重組表達(dá)和抗體制備[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2007年10期

2 任艷敏;黃蓓;魏浩;賴柳靜;;LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗體的制備及其應(yīng)用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2008年11期

3 劉剛;徐元基;姜云波;賈海泉;潘和平;杜芝燕;陸應(yīng)麟;;人腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因mag-2的多克隆抗體的制備和鑒定[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2007年03期

4 楊秉芬,;李平;李娟;瞿秀華;李曉明;柳曉蘭;孫啟鴻;曹誠(chéng);;兔抗人熱激蛋白70樣蛋白1多克隆抗體的制備與初步鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2009年05期

5 胡文森 ,吳明杰;~(99m)Tc單克隆抗體的放射免疫顯象:臨床研究[J];國(guó)際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志;1986年01期

6 張燕,薛耀明,郭愛林,張文敏;GST-IRS-4原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及抗GST-IRS4多克隆抗體的制備[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

7 吳鏑,許國(guó)雙,陳香美,師鎖柱,洪權(quán),張萍,呂揚(yáng);抗人有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4多克隆抗體的制備及其在腎臟的定位研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2005年06期

8 徐永春,梁偉波,茍航,陳文婕,朱銀華,賈靜,張林;EB病毒GST-Rta融合蛋白的表達(dá)、純化及其多克隆抗體的制備[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

9 謝忠平,崔萍芳,宋霞,李華,龍潤(rùn)?quán)l(xiāng),洪超,熊秋霞,李文忠,李琦涵;利用HCV多表位復(fù)合抗原制備高效價(jià)抗體[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2005年04期

10 柯杭君,李清芬,李卓婭,姜小丹,馮瑋,徐勇,熊平;抗人跨膜型腫瘤壞死因子-α多克隆抗體的制備和鑒定[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃志剛;郜恒駿;陳錫美;胡鶯;張小燕;孟遜;;兔抗人Argonaute3蛋白多克隆抗體制備、鑒定及組織芯片檢測(cè)其在各種癌組織中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

2 張敏;池霞;洪琴;童梅玲;郭錫熔;;人類肥胖相關(guān)新基因LYRM1多克隆抗體的制備及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

3 楊敏;王鎖英;許小朋;馬潔;毛朝明;仝佳;邱谷風(fēng);胡正軍;王勝軍;邵啟祥;許化溪;;人T-bet基因的表達(dá)、純化及其多克隆抗體的制備[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

4 尤強(qiáng);程琳玲;王穎;王樹軍;張惠珍;葛海良;周光炎;;CML66基因的克隆、原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

5 陳波;錢，

本文編號(hào)：1190253