本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與脫細(xì)胞脊髓支架體外共培養(yǎng)

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【摘要】：目的評價脫細(xì)胞脊髓支架在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)體外培養(yǎng)中的作用,探索最佳接種濃度。方法分離、培養(yǎng)及鑒定SD大鼠BMSCs,誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化。制備脫細(xì)胞脊髓支架,將第3代BMSCs同脫細(xì)胞脊髓支架共培養(yǎng),MTT法檢測細(xì)胞增殖活性,比較與普通培養(yǎng)的差異;取第3代BMSCs以不同濃度[(0.5、1、2、3、4)×106/mL]接種于支架(脊髓支架修整0.5cm小段),檢測細(xì)胞在支架上的粘附率及上架細(xì)胞數(shù),建立接種濃度與細(xì)胞粘附率、上架細(xì)胞數(shù)的關(guān)系回歸方程;掃描電鏡觀察脫細(xì)胞脊髓支架形態(tài)以及細(xì)胞與支架的粘附情況。結(jié)果成功實現(xiàn)BMSCs的分離及培養(yǎng),BMSCs流式鑒定CD29、CD90陽性表達(dá),向神經(jīng)元誘導(dǎo)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)呈陽性表達(dá);與普通培養(yǎng)相比,BMSCs在支架上細(xì)胞增殖活力顯著提高(P0.05);細(xì)胞與支架的粘附率在接種濃度為2×106/mL最高,達(dá)到(79.6±2.7)%,單位體積上架細(xì)胞數(shù)達(dá)到(1.364±0.047)×106/cm3;掃描電鏡觀察支架空間結(jié)構(gòu)良好,細(xì)胞與支架粘附良好,共培養(yǎng)第3天較第1天細(xì)胞數(shù)量明顯增加。結(jié)論脫細(xì)胞脊髓支架具有多通道的空間結(jié)構(gòu),適合BMSCs粘附、存活、增殖,該支架是良好的天然脊髓組織工程材料。當(dāng)粘附率及細(xì)胞上架數(shù)基本達(dá)到最大時的最佳接種濃度為2×106/mL。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院骨科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81271362);國家自然科學(xué)基金青年項目(31000438) 全軍醫(yī)學(xué)科技“十二五”科研重點項目(BWS11C040)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 脊髓損傷是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,由于脊髓損傷后極難再生,因此較難治愈。脊髓損傷修復(fù)一直是醫(yī)學(xué)界的研究熱點。目前治療脊髓損傷的方法主要集中在細(xì)胞移植和組織工程。我們最早報道了脫細(xì)胞脊髓支架的研究工作[1-2]。構(gòu)建脊髓組織工程核心包括細(xì)胞組織工程支架與種子

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