本文關(guān)鍵詞：豬鏈球菌2型MRP和EF雙基因共表達(dá)重組腺病毒載體的構(gòu)建

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【摘要】：旨在構(gòu)建豬鏈球菌2型溶菌酶釋放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)雙基因共表達(dá)重組腺病毒載體。根據(jù)豬鏈球菌2型MRP和EF的基因序列設(shè)計(jì)合成2對引物,以豬鏈球菌2型基因組為模板,擴(kuò)增MRP基因(第1 801-2 513位)和EF基因(第1 783-2 563位)序列,并克隆到pMD18-T載體。然后將MRP基因、IRES元件和EF基因依次定向克隆至腺病毒穿梭載體pShuttle-CMV中構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒pShuttle-CMV-MRP-IRES-EF,再經(jīng)PmeⅠ酶切,然后轉(zhuǎn)化至含腺病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1的BJ5183-AD-1感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)同源重組獲得重組腺病毒載體質(zhì)粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF。PacⅠ酶切線性化該重組腺病毒載體質(zhì)粒,再轉(zhuǎn)染AD-293細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝,最后對細(xì)胞包裝的病毒液進(jìn)行PCR鑒定。結(jié)果表明,克隆的MRP和EF基因測序正確,酶切重組穿梭質(zhì)粒和腺病毒載體質(zhì)粒得到特異酶切產(chǎn)物;線性化的重組腺病毒載體質(zhì)粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF轉(zhuǎn)染AD-293細(xì)胞6 d后也出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變(CPE),在培養(yǎng)細(xì)胞的上清病毒液中也檢測到了MRP和EF基因片段。
【作者單位】： 九江學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;江西省系統(tǒng)生物學(xué)臨床應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【基金】：江西省教育廳科技項(xiàng)目(GJJ12624) 九江學(xué)院博士科研啟動項(xiàng)目(8870909)
【分類號】：S852.61;R346
【正文快照】： 豬鏈球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)是一種重要的人畜共患病的病原體,可引起豬的敗血癥、腦膜炎、支氣管肺炎、關(guān)節(jié)炎和新生仔豬的大量死亡[1];同時也可引起人的感染,導(dǎo)致筋膜炎、腦膜炎和中毒性休克綜合征等嚴(yán)重病癥[2]。近年來,豬鏈球菌病在國內(nèi)外時有流行或暴發(fā),

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7 齊

本文編號：1169623