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環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌L2型頭孢菌素β內(nèi)酰胺酶基因的快速檢測

發(fā)布時(shí)間:2017-11-09 18:30

  本文關(guān)鍵詞:環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌L2型頭孢菌素β內(nèi)酰胺酶基因的快速檢測


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【摘要】:目的建立快速檢測L2型頭孢菌素β內(nèi)酰胺酶的方法。方法利用DNA環(huán)介導(dǎo)恒溫核酸擴(kuò)增法(loopmediated isothermal amplification of DNA,LAMP)針對L2型頭孢菌素β內(nèi)酰胺酶基因設(shè)計(jì)的5條特異性引物,通過引物特異性識別特定Bla L2基因上的7個(gè)獨(dú)立區(qū)域?qū)崿F(xiàn)耐碳青霉烯類嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的檢測。實(shí)時(shí)濁度儀監(jiān)測反應(yīng)結(jié)果表明,LAMP反應(yīng)在65℃恒溫條件下50 min內(nèi)完成;鈣黃綠素可視化檢測表明陽性結(jié)果呈綠色,與陰性結(jié)果差異顯著。結(jié)果 LAMP法最低檢出基因的濃度為2.58 pg/μl,其靈敏度為PCR法的100倍,且具有良好的特異性。結(jié)論 LAMP法具有過程簡單、實(shí)驗(yàn)裝置簡便、結(jié)果肉眼可辨別、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),對非L2型頭孢菌素β內(nèi)酰胺酶基因的結(jié)果呈陰性,適用于臨床L2型頭孢菌素β內(nèi)酰胺酶基因的快速檢測。
【作者單位】: 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院呼吸科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院疾病預(yù)防控制所;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科;
【基金】:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81071399,81271887) 首都醫(yī)學(xué)發(fā)展研究基金資助項(xiàng)目(2009-3071)
【分類號】:R446.5;R378.99
【正文快照】: 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,SMA)是一種全球流行的革蘭陰性MDRO(新型多重藥物抵抗有機(jī)體)[1],可引起人體呼吸道感染。SMA產(chǎn)生至少兩種β-內(nèi)酰胺酶,主要為L1型和L2型[3],是導(dǎo)致細(xì)菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要機(jī)制[2]。L2型為具有絲氨酸活性位點(diǎn)的頭孢

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