本文關(guān)鍵詞：人親磷脂酸磷脂酶A1基因的克隆與序列分析及真核表達載體的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 親磷脂酸磷脂酶A 克隆 序列分析 真核表達載體

【摘要】：目的克隆人親磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)基因,分析該酶基因及其蛋白質(zhì)的序列特征并構(gòu)建PA-PLA1基因真核表達載體,為該酶生理功能的研究提供實驗依據(jù)。方法從人的腎臟組織中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA。擴增人PA-PLA1基因并克隆測序。以Vector NTI 8.0、DNASTAR、ORF finder分析所克隆的人PA-PLA1基因及其蛋白質(zhì)序列。構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.1-PA-PLA1,測序證實后轉(zhuǎn)染小鼠分泌胰島素細胞株MIN6,以Western blotting檢測PA-PLA1蛋白的表達水平。結(jié)果人PA-PLA1基因mRNA全長為2 923 bp,編碼區(qū)長2 238 bp,編碼1個由745個氨基酸殘基組成的蛋白多肽。序列比對表明所克隆的人PA-PLA1基因與牛PA-PLA1基因同源,并與KIAA0725p和p125基因高度相似,三者在脂肪酶家族中形成亞家族,但KIAA0725p蛋白和p125蛋白具有常見的脂肪酶活性中心保守序列GX-S-XG,而PA-PLA1的該序列為SX-S-XG。真核表達載體pcDNA3.1-PA-PLA1構(gòu)建正確并在所轉(zhuǎn)染的MIN6細胞中過表達PA-PLA1蛋白。結(jié)論 PA-PLA1、KIAA0725p蛋白和p125蛋白在脂肪酶家族中形成亞家族,但PA-PLA1具有獨特的脂肪酶活性中心保守序列SX-S-XG。所構(gòu)建的PA-PLA1基因真核表達載體能在MIN6細胞中過表達小鼠PA-PLA1蛋白。該研究結(jié)果將為PA-PLA1生理功能的研究提供實驗依據(jù)。
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院(醫(yī)藥生物技術(shù)重點實驗室及生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室);
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No:NSFC30860094) 廣西自然科學(xué)基金(No:桂科自0991258)
【分類號】：R346
【正文快照】： 磷脂酸(phosphatidic acid,PA)是一種具有多種生物學(xué)功能的脂類信號分子。文獻表明[1],PA是激素、生長因子和細胞因子重要的第二信使,通過活化多種細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的蛋白質(zhì)而在細胞生長、增殖、囊泡輸送和激素應(yīng)答等多種細胞過程發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。PA的產(chǎn)生主要通過兩種途徑,

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李雪梅,趙春麗;人肝再生增強因子基因的克隆和真核表達載體的構(gòu)建[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2005年05期

2 張玉景;張峰;楚東嶺;李立;陳小風(fēng);;人血管生成素1真核表達載體的構(gòu)建及測序[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年42期

3 周艷春;方丹;許燕璇;;小鼠IL-17基因的克隆及其真核表達載體的構(gòu)建[J];海南醫(yī)學(xué);2009年12期

4 尤紅娟;裴冬生;孫偉;王慧;;乙型肝炎病毒X基因cDNA的克隆及真核表達載體的構(gòu)建[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年03期

5 田玉,陳建平;我國不同疫區(qū)杜氏利什曼原蟲ITS片段的克隆及序列分析[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2005年03期

6 張國俊;趙國強;王華啟;張世杰;王蕾;蔣莉;;真核綠色熒光蛋白表達載體pEGFP-C3-MAGE-12的構(gòu)建與表達[J];中國實用內(nèi)科雜志;2006年06期

7 譚廣;王曉剛;程雷;羅海峰;王忠裕;殷朔;;白細胞介素-23基因的克隆及真核雙表達載體的構(gòu)建[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年04期

8 沙丹;譚峰;梁韶暉;潘長旺;;弓形蟲三磷酸核苷水解酶基因的克隆與序列分析[J];溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年01期

9 肖鐘迪;張玉成;房學(xué)東;;攜帶增強綠色熒光蛋白基因的TSLC1真核表達載體構(gòu)建及鑒定[J];山東醫(yī)藥;2010年05期

10 徐卓佳,戴勇,李體遠,彭武建;重組人促紅細胞生成素四環(huán)素調(diào)控真核表達載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國醫(yī)師雜志;2005年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉偉;朱興全;戴榮四;林瑞慶;宋慧群;程天印;劉毅;;湖南省日本血吸蟲線粒體nad4基因的多態(tài)性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

2 劉偉;朱興全;戴榮四;林瑞慶;宋慧群;程天印;劉毅;;湖南省日本血吸蟲線粒體cox1基因的多態(tài)性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

3 閆國和;粟永萍;王軍平;艾國平;王鋒超;鄭懷恩;程天民;;重組真核表達載體pEGFP-N1/PDGF-A的構(gòu)建及真皮干細胞的轉(zhuǎn)染[A];第六屆全國生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會議暨第九屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會議、第五屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

4 趙義;田昕;向志光;栗占國;;HLA-DRB1*0405質(zhì)粒的構(gòu)建及細胞內(nèi)表達[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

5 劉淑艷;王大剛;種靖慧;馬翠花;許琳琳;林永敏;吳克復(fù);鄭國光;;小鼠膜結(jié)合型干細胞因子的克隆及其真核表達載體的構(gòu)建[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

6 田曉濱;孫立;楊述華;;克隆并構(gòu)建人骨形成蛋白-2真核表達載體[A];2006年貴州省醫(yī)學(xué)會骨科學(xué)分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 陳治中;王曉蓓;王琳;毛曉露;陳鳳花;劉峰;胡麗華;;人T細胞免疫球蛋白粘蛋白-3基因及其融合蛋白真核表達載體的構(gòu)建和生物信息學(xué)分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

8 謝輝;王雅靜;帖超男;劉佩娜;;陰道毛滴蟲鐵氧化還原蛋白基因的克隆和序列分析[A];四川省動物學(xué)會第八次會員代表大會暨第九次學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

9 王永久;由振東;崔瑞耀;路長林;何成;;大鼠腦中催產(chǎn)素受體cDNA的克隆和在大腸桿菌與CHO細胞內(nèi)的表達[A];全面建設(shè)小康社會：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會論文集（下）[C];2003年

10 胡朝暉;甘舜進;曾征宇;劉元力;朱慶義;;中國人纖溶酶原kringle 5結(jié)構(gòu)域功能區(qū)基因克隆及序列分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表達載體的構(gòu)建及在HepG2細胞中的表達[N];中國醫(yī)藥報;2003年

2 張中橋;AMCase基因突變體克隆成功[N];中國醫(yī)藥報;2006年

3 吳一福;首次成功分離出HPA全長編碼基因[N];中國醫(yī)藥報;2005年

4 張中橋;西京醫(yī)院建立穩(wěn)定表達MAGE-n細胞系[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 康文遠;從口腔中克隆6個新基因[N];健康報;2000年

6 衣曉峰;甲狀旁腺功能低下難題有望破解[N];中國醫(yī)藥報;2001年

7 張中橋;胃癌免疫治療研究有新進展[N];中國醫(yī)藥報;2002年

8 萬同己;乙肝的基因治療[N];中國醫(yī)藥報;2004年

9 張中橋;納米微囊載體具有基因治療應(yīng)用潛能[N];中國醫(yī)藥報;2004年

10 張中橋;可誘導(dǎo)性真核表達載體構(gòu)建成功[N];中國醫(yī)藥報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田玉;中國不同疫區(qū)L.d.ITS序列分析及L.p.PAL、HSP60基因克隆和真核表達[D];四川大學(xué);2005年

2 康巧珍;幽門螺桿菌中性白細胞激活蛋白基因克隆表達及免疫評價[D];鄭州大學(xué);2005年

3 張洪濤;艾滋病毒顆粒樣疫苗的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

4 張麗君;bFGF基因轉(zhuǎn)染成骨細胞的生物學(xué)性質(zhì)及成骨研究[D];華南理工大學(xué);2003年

5 馬越云;抗LPS Fab、BPI和Fab-BPI融合蛋白真核表達載體的構(gòu)建及其在CHO細胞中的表達[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

6 寧鉑濤;鼠抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9單鏈抗體的研究[D];浙江大學(xué);2005年

7 張守純;p16真核表達載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

8 章金濤;豫醫(yī)無毛小鼠的生物學(xué)特征及其分子遺傳學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2005年

9 許貞書;人血液血管細胞生成素對骨髓基質(zhì)細胞生物學(xué)作用的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2005年

10 宋平;惡性瘧原蟲abstrakt同源基因的克隆及食蟹猴瘧原蟲eIF-4A同源蛋白的cDNA克隆、表達和ATP酶活性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 閆峻;烏蘇里蝮蛇具抑制血小板聚集活性的金屬蛋白酶分離純化及基因信息學(xué)分析[D];吉林大學(xué);2005年

2 盧春生;人骨形成蛋白2和7成熟肽編碼區(qū)基因克隆和真核表達載體的構(gòu)建[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2009年

3 汪東籬;淋球菌外膜蛋白PI的克隆、序列分析及表達[D];四川大學(xué);2005年

4 崔巖;變形鏈球菌延伸因子（EF-Tu）tuf基因的克隆及序列分析[D];吉林大學(xué);2007年

5 黃家芳;日本血吸蟲Dna J-類似蛋白基因原核、真核表達載體的構(gòu)建及其對小鼠的保護性免疫作用研究[D];南華大學(xué);2005年

6 汪雪峰;球形幽門螺桿菌vacA、cagA基因克隆及序列分析[D];安徽理工大學(xué);2005年

7 陳華華;人α-防御素-1（HNP-1） cDNA的克隆和序列分析及真核表達載體的構(gòu)建[D];武漢大學(xué);2005年

8 楊捷;人特異性抗 蛋白酶性保護因子Elafin的克隆及真核表達載體pEGFP-N1-elafin的構(gòu)建及在肺上皮細胞中的表達[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

9 左國偉;人乳頭瘤病毒11型E6基因的克隆、真核表達及其功能的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

10 張勇;人ALEX2基因的克隆、表達與純化及生物信息學(xué)分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

，

本文編號：1144788