發(fā)布時間：2017-11-01 16:12

  本文關(guān)鍵詞：GlnRS與ArgRS多抗的制備及表達分析

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【摘要】：氨酰-tRNA合成酶(AARS)為一類蛋白合成的關(guān)鍵酶,將特定的氨基酸鏈接到對應(yīng)的tRNA上。它除了具有經(jīng)典的催化功能外還具有調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、促進細胞轉(zhuǎn)移、DNA損傷修復(fù)、抑制血管生成、誘導(dǎo)細胞凋亡等非經(jīng)典功能。谷氨酰胺-tRNA合成酶(GlnRS)和精氨酸-tRNA合成酶(ArgRS)是AARS成員之一,除了經(jīng)典的催化功能外,還具有多種非經(jīng)典功能,與諸多疾病存在密切的聯(lián)系。研究GlnRS和ArgRS的結(jié)構(gòu)和功能可為揭示相關(guān)的疾病機制提供理論依據(jù)。目的:本實驗的目的就是制備GlnRS和ArgRS抗體,并研究它們在不同細胞的表達情況,為下一步其功能的深入研究奠定基礎(chǔ)。方法:1.GlnRS和ArgRS多抗的制備及檢測運用生物信息學(xué)的方法對GlnRS和ArgRS進行分析確定抗原部位。通過PCR獲取編碼抗原片段的目的基因,將其插入PET28a構(gòu)建表達載體。將重組子轉(zhuǎn)化表達菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達重組蛋白,并用鎳柱進行純化。以制備的重組蛋白為抗原,背部皮下注射小鼠制備多抗,并用western blot法檢測其特異性。2.GlnRS和ArgRS在不同細胞的表達分析以制備的抗體為一抗,western blot檢測不同細胞GlnRS和ArgRS的表達并進行分析。結(jié)果:1.GlnRS和ArgRS多抗的制備及檢測經(jīng)過生物信息學(xué)分析,我們確定GlnRS N端236個氨基酸(N(1-236)-GlnRS)為制備GlnRS抗體的抗原,ArgRS N端72個氨基酸(N(1-72)-ArgRS)為制備ArgRS抗體的抗原。PCR獲得了目的基因N(1-236)-GlnRS和N(1-72)-ArgRS,并成功構(gòu)建了表達載體PET28a-N-GlnRS和PET28a-N-ArgRS。重組蛋白N-GlnRS和N-ArgRS獲得表達與純化。成功制備了GlnRS和ArgRS抗體,且特異性較好。2.GlnRS和ArgRS在不同細胞的表達分析在GlnRS和ArgRS表達分析中,GlnRS在HeLa細胞高表達,在腫瘤細胞HepG2和正常細胞LO2中表達沒有顯著差異。GlnRS的表達量在Eμ-Myc高表達的B淋巴瘤細胞比在正常B淋巴細胞要高,并且惡性程度越高表達量越高。ArgRS在腫瘤細胞HepG2的表達量比在正常細胞LO2高,但在HeLa細胞表達量沒有明顯增加。結(jié)論:1.成功制備GlnRS與ArgRS抗體,且特異性較好,為下一步GlnRS和ArgRS在蛋白水平的研究奠定基礎(chǔ)。2.GlnRS和ArgRS的表達隨腫瘤細胞惡性程度和腫瘤發(fā)生的機制不同而有差異,GlnRS和ArgRS的表達并不是在所有腫瘤細胞中都比正常細胞表達量增高。
【關(guān)鍵詞】：GlnRS ArgRS 多抗制備 表達分析
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一章 文獻綜述9-23
• 1. 氨酰-tRNA合成酶9-17
• 2. 多酶復(fù)合體結(jié)構(gòu)17-19
• 3. 谷氨酰胺-tRNA合成酶19-20
• 4. 精氨酸-tRNA合成酶20-21
• 5. 研究內(nèi)容與意義21-23
• 第二章 材料與方法23-41
• 1. 實驗材料23-27
• 2. 常用儀器設(shè)備27-28
• 3. 常用方法28-41
• 第三章 人GlnRS多抗的制備與表達分析41-55
• 1. 材料與方法41-42
• 2. 結(jié)果與分析42-53
• 3. 討論53-55
• 第四章 人ArgRS多抗的制備與表達分析55-66
• 1. 材料與方法55-56
• 2. 結(jié)果與分析56-64
• 3. 討論64-66
• 第五章 總結(jié)與展望66-68
• 1. 已取得的成果66
• 2. 有待進一步的探究66-67
• 3. 研究展望67-68
• 參考文獻68-75
• 研究生期間的科研成果75-76
• 附錄76-78
• 致謝78-79

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