本文關(guān)鍵詞：人臍靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)方法的改進

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【摘要】：目的建立高效、可靠、經(jīng)濟的人臍靜脈內(nèi)皮細胞原代培養(yǎng)方法,為體外研究血管內(nèi)皮細胞提供實驗手段。方法取健康剖腹產(chǎn)新生嬰兒臍帶,立即用0.1%Ⅰ型膠原酶室溫消化,得血管內(nèi)皮細胞,置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱進行原代培養(yǎng),培養(yǎng)基采用M199培養(yǎng)基,含有10%胎牛血清、2 mmol/L谷氨酰胺、50μg/ml肝素鈉、10 u/mlbFGF(貝復(fù)濟,牛堿性成纖維細胞生長因子,basic fibro blast growth factor)、100 u/ml青霉素、50 u/ml慶大霉素。在倒置顯微鏡下觀察原代及傳代細胞的形態(tài)特點,同時用免疫組織化學(xué)的方法對所得細胞進行鑒定。結(jié)果采用0.1%Ⅰ型膠原酶灌注法及改良培養(yǎng)基獲得了相當數(shù)量的人臍靜脈內(nèi)皮細胞。光鏡下觀察見大量3~4個成團的內(nèi)皮細胞。細胞接種后4 h開始貼壁生長,5 d左右可融合成片,原代細胞呈小三角形、圓形或梭形,細胞分布不均勻,成簇生長,互不重疊;傳代細胞多為扁平多角形鋪路石狀鑲嵌排列,3 d左右可融合成片。免疫組化可見內(nèi)皮細胞胞漿中人第Ⅷ因子相關(guān)抗原呈陽性反應(yīng)。結(jié)論Ⅰ型膠原酶灌注法是獲得臍靜脈內(nèi)皮細胞的一種可取方法,成功率高,可靠性大。改良培養(yǎng)基能很好地促進內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)及傳代擴增,可成功構(gòu)建體外研究血管內(nèi)皮細胞的模型。
【作者單位】： 福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬寧德市醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 鑒定 細胞培養(yǎng)
【基金】：福建省衛(wèi)生廳青年科研課題(2011-1-45) 寧德市科學(xué)技術(shù)計劃項目(20110008),細胞分子生物學(xué)實驗室(一級)
【分類號】：R329
【正文快照】： 糖尿病血管病變(Diabetic vasculopathy)是常見的糖尿病并發(fā)癥之一,也是導(dǎo)致糖尿病病人死亡的主要原因之一,多種因素參與了這一病理過程,其中血管內(nèi)皮細胞功能紊亂是主要的發(fā)病機制[1,2]。因此,建立血管內(nèi)皮細胞模型,研究內(nèi)皮細胞功能變化與糖尿病血管病變的關(guān)系以及藥物對血

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【二級參考文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：1118299