本文關(guān)鍵詞：O1群小川型霍亂弧菌單克隆抗體識別表位模擬肽的篩選鑒定

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【摘要】：目的:以純化的有高度特異性的IXiao3G6單抗為靶分子,對噬菌體隨機(jī)7肽庫進(jìn)行淘篩,以期篩選到與O1群小川型霍亂弧菌單抗有高親和力的模擬肽,為基于表位的霍亂弧菌模擬多肽疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。方法:運(yùn)用噬菌體隨機(jī)7肽庫技術(shù),以純化的IXiao3G6單抗為靶蛋白,進(jìn)行噬菌體隨機(jī)肽庫3輪篩選,以雙抗夾心ELISA和競爭抑制實(shí)驗(yàn)分析獲得的噬菌體短肽與篩選配基的結(jié)合能力及特異性,并進(jìn)行陽性克隆序列測定和同源性分析。結(jié)果:3輪篩選后,陽性噬菌體得到有效富集,夾心ELISA檢測隨機(jī)挑取的25個(gè)噬菌體克隆,有22個(gè)噬菌體克隆為陽性,測序表明其中20個(gè)陽性克隆的氨基酸序列完全一致,均為APAIPAS。對該序列同源性分析,未發(fā)現(xiàn)有相同的已知序列。競爭抑制實(shí)驗(yàn)表明,O1群小川型霍亂弧菌脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)能很好地抑制陽性克隆與IXiao3G6McAb的結(jié)合,抑制程度隨LPS濃度的升高而增加,而對照細(xì)菌的LPS則不具有相應(yīng)的抑制作用,進(jìn)一步提示噬菌體克隆展示肽模擬了O1群小川型霍亂弧菌LPS抗原表位。結(jié)論:篩選到模擬O1群小川型霍亂弧菌LPS的抗原表位的模擬肽,為基于表位的霍亂弧菌模擬多肽疫苗的開發(fā)與設(shè)計(jì)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院輸血科;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科;重慶醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)一系;重慶醫(yī)科大學(xué)感染性疾病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： O群小川型霍亂弧菌 單克隆抗體 噬菌體隨機(jī)肽庫 模擬肽
【基金】：國家“863”高科技發(fā)展計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號:2002AA215015) 重慶市醫(yī)學(xué)科研計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號:2009-2-200)
【分類號】：R392
【正文快照】： 霍亂在世界范圍內(nèi)具有很高的發(fā)病率和死亡率,每年發(fā)病人數(shù)估計(jì)約500萬,至少引起14萬人死亡,而有效的霍亂控制目標(biāo)在于將病死率降至1%以下[1]。早期的滅活菌苗已證實(shí)對控制霍亂無效,世界衛(wèi)生組織已不再推薦該疫苗的使用;目前研制的口服疫苗具有較好的安全性和免疫保護(hù)率,但仍然

【共引文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳銳;核糖體展示人源性scFv文庫的構(gòu)建及篩選抗人LBP抗體的局限性分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 葛曉冬,劉友生,王曉東,王長松,鄧軍,李紅;人源噬菌體抗體庫的構(gòu)建及抗人NH-LBP抗體的篩選與鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2005年02期

2 高霞,張宏巖,付鳴,王世平;霍亂弧菌檢驗(yàn)研究進(jìn)展[J];中國衛(wèi)生工程學(xué);2002年03期

3 蔣力生,陳鵬;膿毒癥與內(nèi)毒素血癥的治療現(xiàn)狀與展望[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2004年06期

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本文編號：1114977