本文關鍵詞：富血小板血漿與血小板裂解液對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖影響的比較

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【摘要】：目的通過對比分析富血小板血漿(platelet rich plasma,PRP)與血小板裂解液(platelet lysate,PL)對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)生長增殖、細胞周期的作用,探討二者對大鼠BMSCs生長增殖的影響。方法取20只4周齡SD大鼠,采用全骨髓分離培養(yǎng)法擴增傳代BMSCs,并采用流式細胞儀鑒定;另取30只12周齡SD大鼠心內(nèi)采血,梯度離心法獲得PRP,采用3次離心結合反復凍融法制備PL。取生長狀態(tài)良好的第3代BMSCs進行實驗,根據(jù)培養(yǎng)基成分不同將實驗分為7組,普通完全培養(yǎng)基組(A組)、1%PRP條件培養(yǎng)基組(B組)、1%PL條件培養(yǎng)基組(C組)、5%PRP條件培養(yǎng)基組(D組)、5%PL條件培養(yǎng)基組(E組)、10%PRP條件培養(yǎng)基組(F組)及10%PL條件培養(yǎng)基組(G組)。MTT檢測BMSCs增殖情況;免疫熒光檢測BMSCs中增殖細胞核抗原(PCNA)的表達情況;流式細胞儀檢測BMSCs細胞周期的變化;蛋白質(zhì)印跡檢測CyclinD1和p27Kip1蛋白表達。結果培養(yǎng)24、48、72h時,1%、5%、10%PRP與1%、5%、10%PL條件培養(yǎng)基組均可以促進BMSCs的增殖,并具有時間、劑量依賴性(P0.05);相同濃度的PRP與PL對BMSCs增殖作用的差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫熒光檢測顯示,PRP與PL均可以促進PCNA蛋白表達(P0.05),且呈劑量依賴性(P0.01)。流式細胞儀檢測顯示,不同濃度PRP及PL條件培養(yǎng)基組與普通完全培養(yǎng)基組比較,G0/G1期細胞比例逐漸減少,S、G2/M期細胞比例逐漸增多,增殖指數(shù)(PI)升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),并呈劑量依賴性(P0.05);然而,相同濃度的PRP及PL對BMSCs細胞周期的影響相似,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。蛋白質(zhì)印跡檢測結果顯示,5%PRP與5%PL能促進CyclinD1表達上調(diào)和p27Kip1表達下調(diào)。結論不同濃度PRP與PL能夠通過上調(diào)CyclinD1以及抑制p27Kip1蛋白的表達,加快體外培養(yǎng)的大鼠BMSCs的細胞周期進程,促進BMSCs增殖,并呈現(xiàn)顯著的時間、劑量依賴性;BMSCs增殖過程中,相同濃度PL與PRP的促增殖效果相同,PL可能代替PRP促進骨缺損修復。
【作者單位】： 河北聯(lián)合大學醫(yī)學實驗研究中心;河北聯(lián)合大學基礎醫(yī)學院藥理學教研室;河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院骨科;
【關鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細胞 富血小板血漿 血小板裂解液 組織工程 細胞周期 細胞增殖
【基金】：唐山市科技局重點實驗室建設項目(10140201A-12)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 近年來,血液系統(tǒng)不同成分在骨再生和修復過程中所發(fā)揮的重要作用引起越來越多的關注。已有眾多研究關注凝血機制與骨再生修復之間的聯(lián)系以及血小板成分對骨再生的促進作用[1-2]。創(chuàng)傷等原因激發(fā)了凝血機制后,被激活的血小板將釋放出多種生物活性物質(zhì),如凝血因子、促血管活性因

【共引文獻】

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