本文關(guān)鍵詞：DEN2感染對MyD88沉默的小鼠樹突狀細(xì)胞相關(guān)膜分子表達(dá)及炎癥因子分泌的影響

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【摘要】：目的:探討髓樣分化因子88(MyD88)在DEN2感染BMDC后對其成熟及相關(guān)炎癥因子分泌的影響。方法:利用rmIL-4、rmGM-CSF聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)BMDC;針對BMDC MyD88基因,設(shè)計(jì)并合成3對MyD88 siRNA,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染BMDC;通過Western blot篩選一對高沉默效率的MyD88 siRNA;常規(guī)方法增殖及鑒定DEN2;直接免疫熒光及RT-PCR鑒定DEN2吸附BMDC;流式細(xì)胞術(shù)分析對照組、感染組、RNAi組、感染RNAi組、無義RNAi組BMDC膜表面分子CD86、MHCⅡ的表達(dá),雙抗體夾心ELISA法檢測上清液中IP-10、TNF-α及IFN-α的分泌水平。結(jié)果:經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)后可獲得CD11c表達(dá)為70.85%±2.66%的相對未成熟的BMDC;與空白對照組相比,序列1～3組的MyD88蛋白質(zhì)表達(dá)率分別降低28.36%±14.26%、54.20%±22.93%、73.14%±11.80%,其中序列3的沉默效率最高,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);DEN2可吸附BMDC。與對照組比較,DEN2感染組DC膜表面分子CD86表達(dá)降低,MHCⅡ增高,感染RNAi組的MHCⅡ、CD86表達(dá)無明顯變化;與對照組比較,DEN2感染組分泌TNF-α、IFN-α及IP-10的水平均增高,而感染RNAi組分泌的IP-10、IFN-α、TNF-α則無明顯變化。結(jié)論:DEN2可吸附BMDC,并促使其成熟及細(xì)胞因子分泌;siRNA可沉默MyD88,有效阻斷DEN2感染BMDC的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)及其所引起的成熟及炎癥因子分泌。
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： DEN BMDC MyD RNA干擾
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31060129) 貴州省優(yōu)秀人才省長基金 貴州省教育廳“125”重大科技專項(xiàng)資助
【分類號】：R392.12
【正文快照】： 樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)具有攝取、處理和提呈抗原至T細(xì)胞的功能,可有效激活初始T細(xì)胞,誘發(fā)初次免疫應(yīng)答。DC可作為病毒感染的靶細(xì)胞,包括麻疹病毒、HIV、漢坦病毒、黃熱病毒和流感病毒[1]。當(dāng)其處于未成熟狀態(tài)時,可與環(huán)境中病原體發(fā)生結(jié)合,從而產(chǎn)生相關(guān)的受體及其形

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本文編號：1079627