本文關(guān)鍵詞：小鼠水通道蛋白1基因慢病毒載體構(gòu)建及其在神經(jīng)膜細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 水通道蛋白 過表達(dá) 慢病毒 神經(jīng)膜細(xì)胞

【摘要】：目的構(gòu)建表達(dá)小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒載體,體外感染原代培養(yǎng)的C57BL/6小鼠神經(jīng)膜細(xì)胞,觀察是否提高AQP1的表達(dá),為進(jìn)一步研究AQP1與周圍神經(jīng)系統(tǒng)損傷后水腫的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。方法將小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP載體,通過PCR和測序鑒定獲得連接正確的克隆。將鑒定后的重組表達(dá)質(zhì)粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1與包裝質(zhì)粒psPAX2、pMD共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,制備攜帶AQP1基因的慢病毒lentivirus-AQP1。體外培養(yǎng)C57BL/6小鼠的神經(jīng)膜細(xì)胞,將lentivirus-AQP1感染神經(jīng)膜細(xì)胞,RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測感染后神經(jīng)膜細(xì)胞AQP1 mRNA和蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果構(gòu)建的慢病毒載體pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1經(jīng)PCR鑒定和測序正確。慢病毒lentivirus-AQP1感染神經(jīng)膜細(xì)胞后AQP1表達(dá)增加(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了小鼠AQP1基因的慢病毒表達(dá)載體,該載體能有效感染神經(jīng)膜細(xì)胞,使AQP1 mRNA和蛋白表達(dá)水平增高。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院整形外科;南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形美容科;
【關(guān)鍵詞】： 水通道蛋白 過表達(dá) 慢病毒 神經(jīng)膜細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31271264) 上海市科委基礎(chǔ)研究重點(diǎn)課題(08JC1407100)~~
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP1)存在于多種組織細(xì)胞中,參與水的排出、吸收及細(xì)胞內(nèi)外水平衡的維持,與組織器官水腫的形成和消除密切相關(guān),對膠質(zhì)細(xì)胞的作用發(fā)揮有重要影響,是一種高效介導(dǎo)跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)的膜蛋白[1]。已有研究發(fā)現(xiàn),AQP1是周圍神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)最多的AQP,并且定位在神經(jīng)

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本文編號(hào)：1079345